T CVMA 18-2020 塞内卡病毒荧光RT-PCR检测方法.pdf

ICS 11.220 B 41 团 体 标 准 T/CVMA 18-2020 塞内卡病毒荧光 RT-PCR 检测方法 Real-time RT-PCR assay for detection of Senecavirus A 2020-12-22 发布 2020-12-22 实施 中 国 兽 医 协 会    发布 T/CVMA 18-2020 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》 的规定起草。 本文件由中国兽医协会提出并归口。 本文件起草单位：青岛立见诊断技术发展中心、中国动物卫生与流行病学中心。 本文件主要起草人：张志、李阳、孙学强、刘爽、徐烽烨、王永玲、宫枫举、官丽娟、邵 钰、李翠翠、李晓成、尼博、于晓慧、王琳、周晓翠。 - 1 - T/CVMA 18-2020 塞内卡病毒荧光 RT-PCR 检测方法 1　范围 本文件规定了塞内卡病毒荧光RT-PCR检测时的仪器设备、样品采集保存和运输、荧光PCR 操作程序、结果判定、注意事项。 本文件适用于猪水泡皮、EDTA抗凝全血、脾脏等组织及猪制品中塞内卡病毒的核酸检测。 2　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的 引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有 的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 SN/T 1193 基因检验实验室技术要求 3　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4　缩略语 下列缩略语适用于本文件。 SVA：塞内卡病毒（Senecavirus A ） 荧光RT-PCR ：实时荧光反转录聚合酶链式反应（Real-time RT-PCR ） Ct ：扩增循环次数（Threshold cycle ） FAM ：羧基荧光素（Carboxyfluorescein ） 5　仪器设备 5.1　荧光 PCR 检测仪 5.2　台式冷冻离心机（可控温至 4 ℃、离心速度可达 12 000 r/min 以上） 5.3　冰箱（2 ℃~8 ℃、-20 ℃和-70 ℃三种） 5.4　微量移液器（0.1 μL~2.5 μL、1 μL~10 μL、10 μL~100 μL、100 μL~1000 μL ）及匹配的吸 头 5.5　高压灭菌锅 5.6　6 耗材 5.6.1 1.5 mL 和 5 mL 离心管 5.6.2 0.2 mL PCR 薄壁管或八联管 - 2 - T/CVMA 18-2020 5.6.3 10 μL~200 μL 带滤芯吸头 5.6.4 15 mL 样品保存管 6　试剂 6.1 病毒 RNA 提取试剂盒 6.2 SVA 检测引物和荧光探针，序列如下： 上游引物qSVA-F ：5’-CTGCGCTGGGACCGTATCTCA-3’ 下游引物qSVA-R ：