制药单元操作 膜分离原理 认识色谱分离技术.docx

药品生产技术专业教学资源库-《制药单元操作技术》教学设计 教 师 姓 名 授课班级 授课形式 讲授 授 课 日 期 授课时数 2 授课内容 情景11 新型分离技术与设备 任务3 认识色谱分离技术 教 学 目 的 知 识 目 标 熟悉色谱分离设备的结构 理解色谱分离工艺流程和工作原理； 学会分析色谱分离过程 能 力 目 标 1．能依据分离物系的性能及分离要求确定合理的色谱流程； 2．能够分析、判断和解决色谱分离生产中发生的生产问题。 思 想 目 标 1. 具有分析问题解决问题的能力； 2. 具有一定组织协调能力； 3. 具有搜索、整理材料及文字表达相关能力 教 学 重 点 认识色谱分离工艺流程 教 学 难 点 色谱分离原理 更新、补充、 删 节 内 容 增加系列实例分析 使 用 教 具 多媒体 课 外 作 业 补充 课 后 体 会 授课主要内容及课堂教学设计 教学 环节 课 程 内 容 设 计 教学 方法 时间 引入 新课 专业教育 是非观培养 培养分析问题能力 小结 作业 任务3 认识色谱分离技术 色谱分离法又称层析法，它利用不同组分在两相中物理化学性质（如吸附力、分子极性和大小、分子亲和力、分配系数等）的差别，通过两相不断的相对运动，使各组分以不同的速率移动，而将各组分分离。 工业应用 乙肝疫苗HBsAg聚合蛋白的精制 乙肝疫苗在分离工艺中的最后一步是采用一种方式进行重组HBsAg聚合蛋白的精制，将浓缩液通过Sepharose4FF凝胶柱进行精制后，根据其分子量的大小出现了3个洗脱峰，进行测定，发现A峰杂蛋白，B峰和C峰为活性组成，见图11-57。收集B峰，除菌过滤后即得纯品，收率达48%，其产品即为乙肝疫苗，并能达到世界卫生组织的标准。像这种依据其分子的大小而进行分离的技术就是凝胶过滤层析分离法。 凝胶过滤层析法是一种新型的分离方法，也称分子筛层析法，凝胶扩散层析、排阻层析、限制扩散层析等。是利用凝胶过滤层析介质的网状结构，根据分子大小不同而被分离的一种分离技术。如图11-56所示，当含有不同大小的分子进入凝胶层析柱内时，较大的分子不能通过孔道扩散进入凝胶内部，较小的则程度不同地进入凝胶内部，由于不同分子大小的物质由于扩散速率的不同造成了它们在凝胶柱内的停留时间也不相同，其结果较小分子的物质在柱内的停留时间相对较长，使得不同分子大小的物质在凝胶内部向柱下流动的速度也不同，因而不同的物质也就按分子的大小分开了，最先淋出的是大分子的物质。 图11 图11-57 乙肝疫苗Sepharose 4FF凝胶过滤谱 图11-56 凝胶过滤分离过程示意图 大圆圈—凝胶颗粒，大黑点—高分子物质， 较小黑点—较低分子量物质，小黑点—低分子物质 （a）开始时（b）淋洗开始（c）淋洗阶段 子任务1 认识萃取操作规程 子任务1 认识色谱分离装置 一、认识色谱分离设备 色谱分离法又称层析法，它利用不同组分在两相中物理化学性质（如吸附力、分子极性和大小、分子亲和力、分配系数等）的差别，通过两相不断的相对运动，使各组分以不同的速率移动，而将各组分分离。 （一）色谱分离设备 不同的色谱方法，其工艺构成有所不同，下面以柱色谱为例。柱色谱系统主要由进样及流动相供给装置、色谱柱、检测器及流分收集装置、控制器等几部分构成。典型的色谱分离工艺设备构成如图11—58所示： 图11-58 柱色谱分离设备 1．进样及流动相供给装置 在制备型和工业型色谱系统中，流动相供给装置一般包括储液罐、高压泵、液体混合室及梯度洗脱系统。此外，进样体积大时，进样器需附带输液泵。有时为了保护昂贵的色谱柱，在色谱柱前需加上一支预处理柱。高压泵主要用来输送流动相，分恒压和恒流两种基本类型。 2．色谱柱 色谱柱是实现料液中各种组分有效分离的关键装置，可以是内装色谱剂的玻璃柱或金属柱。柱的人口端应有进料分布器，使进入柱内流动相分布均匀并有规则的流型。柱的底部用以支持固定相的，可以是玻璃棉或砂芯玻璃板等。对分离过程的温度有严格要求，色谱柱具有双层管结构，管间可通水保温。图11-59是一种常见的色谱柱的结构示意。色谱柱由腔体、液体分配板、集液板、流动相进出口构成。 一般情况下，柱的分离效率与柱长成正比，与柱的直径成反比。因此，色谱柱通常是细长的，一般L／D=20～30，柱直径大多为2～1 5 cm。柱径大时，样品的负载量增加，但流动很难均匀，分离效果差，柱径小时，进样量少，装柱困难。色谱柱的装填好坏，直接影响分离效果，因此，装柱要采取适宜方法，确保装填均匀。 图11-59 色谱柱的结构示意图 3．检测器与流分收集装置 通过检测器连续监测柱底出口处液体中各组分的浓度变化，可以了解样品