微核汇报最终.ppt

微 核 实 验 汇 报 Scientific and technological innovation lead the future VICHO 目 录 设计思路…………………………01 实验原理…………………………04 实验方法…………………………05 实验过程…………………………06 微核展示…………………………15 统计结果…………………………16 结果分析…………………………20 存在问题…………………………23 实验总结…………………………24 参考文献…………………………25 实 验 设 计 思 路 在设计实验方案时，日常生活中的食品、用品都曾成为我们讨论的话题，不过最终我们把视线移向了亚硝酸钠（强致癌物质），进而联想到生活中可能含有亚硝酸盐的常见食品，例如腌菜、香肠等。 01 查阅资料得知 短期腌制蔬菜(“暴腌菜”)亚硝酸盐的含量超国家标准25倍以上； 亚硝酸钠作为国家食品卫生法允许使用的食品添加剂被广泛应用于肉质品(如香肠)加工中，残留超标对人体有极大危害[1]； 亚硝酸钠能与各种氨基化合物(主要来自蛋白质的分解产物)反应，产生致癌的N-亚硝基化合物，它是一种很强的致癌物质； 02 上述信息中我们发现不论是“暴腌菜”还是香肠的安全性都主要与亚硝酸盐的含量有关，那么究竟亚硝酸盐的毒性如何？我们经常食用的腌菜、香肠是否存在安全问题？因此，我们决定利用植物微核检测亚硝酸钠的毒性以及腌菜与香肠的安全性。 设想：能否通过做出亚硝酸钠致微核率的趋势线(“标准曲线”)，从而得出腌菜、香肠的亚硝酸盐含量？ 03 微核定义：在有些情况下细胞中除了有一个正常的细胞核外，还可以看到与核着色相同、大小不等（在主核1/3以下）、完全与主核分开的圆形或椭圆形微小核，细胞学上称为微核。 实 验 原 理 微核形成机理 由于理化因素引起染色体断裂或干扰染色体行为使之落后，当大部分染色体到达细胞两极并重新被核膜包裹时，落后的染色体或染色体片段不能进入主核，便形成了独立于主核之外的核物质团，并在间期时浓缩成小核(微核)。 04 实 验 方 法 利用蚕豆根尖分生组织细胞有丝分裂形成微核的根尖微核技术 05 显微镜、恒温水浴锅、电炉、镊子、 解剖针、烧杯、培养皿、锥形瓶、离心管、载玻片、盖玻片、吸水纸、标签纸 实验前准备 --- 器材、试剂、选材 Carnoy氏固定液 、70%酒精、 1 mol/L HCl、醋酸地衣红染液、蒸馏水 NaNO2 器材 试剂 实 验 过 程 选材 烤肠、腌菜水(取自桂园食堂) 蚕豆(实验室提供) 06 在各大数据库进行文献检索，搜集与课题有关的文献作为参考。 查阅资料 清洗仪器 将要用到的仪器清洗干净待用。 实验前准备 07 配制浓度为25mg/L、50mg/L、100mg/L 、200mg/L 、400mg/L [2]的亚硝酸钠溶液。 称取0.0800gNaNO2溶于一定量蒸馏水中，加水至200mL。取100mL即为最高一级 梯度。取原液逐级稀释得到各梯度溶液。分别贮藏备用。 A亚硝酸钠梯度溶液 B香肠浸提液 将预备好的烤肠捣碎成泥状，转移到烧杯中，加适量水于电炉上进行加热。不断搅拌混合物，适时加水。待到搅动阻力明显减小时，过滤混合物，收集滤夜，贮藏备用。 D卡诺氏固定液 取95%乙醇和冰醋酸按3:1的比例配制，用时配制即可。 实验前准备 --- 配制溶液 腌菜水设置为两个浓度梯度，即原浓度与1/2原浓度 。 C腌菜水 08 实验操作 1.浸种催芽 先在大烧杯中集体浸泡一段时间，后转出，分装到培养皿中继续浸泡。 *注意换水 1 2 3 4 09 2.处理 CK – 400mg/L 香肠浸提液 待蚕豆根尖长至1～2cm左右，用被检测液处理根尖，每一处理选取6～8粒初生根尖生长良好、根长一致的种子，放入盛有被检测液的培养皿中，被检测液浸泡根尖。 同时，取另一培养皿以蒸馏水处理根尖，作为对照。处理时间约为6小时。 实验操作 10 3.恢复培养 待处理结束后，将各组种子用蒸馏水浸洗三次，每次2～3min，再将洗净的种子放回培养皿进行恢复培养22～24小时。 实验操作 11 4.固定根尖细胞 将恢复后的种子从根尖顶端切下1～2cm长的幼根，按照分组分别放入贴好标签的10ml离心管中。加入适量新配制的卡诺氏固定液，进行固定2～24小时。 因为固定后镜检无法一次性完成，故先保存于70%酒精溶液中。待镜检时再取出使用。 实验操作 12 5.制片镜检 将根尖从酒精中取出，用蒸馏水漂洗三次，装入离心管中加入 1 mol/L HCl 60℃恒温水浴解离10min。取出后漂洗三次。取根尖分生组织（1-3mm）加1-2滴醋酸地衣红染液，用镊子夹碎组织并去除大的组织块，染色约5min