人教版高中生物课件选修一课题3血红蛋白的提取和分离.pptVIP

专题 5 DNA 和蛋白质技术 课题 3 血红蛋白的提取和分离 2003 年 4 月 14 日宣布人类基因组序列图完成 这标志着进入了后基因组时代。 人类基因组：指 DNA 分子所携带的全部 遗传信息。 蛋白质组：生物个体表达的蛋白质分子的 总和。主要是对蛋白质功能的研究 ? ? 新华网首尔１２月２９日电（记者 干玉兰）韩国浦项工业大学科学家２９日宣布， 他们已查明可抑制艾滋病病毒感染的“ＴＲＩＭ５”蛋白质核心部分的结构。 ? 浦项工业大学生物科学系教授吴秉夏等人，当天公开了“ＴＲＩＭ５”蛋白质内核心 部分“Ｂ３０．２／ＳＰＲＹ”的三维分子结构，并称已弄清楚这一结构的正确位置及它 与其他结构之间的相互作用。研究成果发表在最新一期《分子细胞》杂志上。 2 ００４年英国《自然》杂志曾刊登论文说，“ＴＲＩＭ５”蛋白质可有效抑制艾滋 病病毒的感染。此后，世界各地的很多科学家开始研究“ＴＲＩＭ５”蛋白质的结构，但 到目前为止尚未有人宣称取得突破性进展。 ? 我国对蛋白质的现阶段研究 ? ? 我国独立主持国际“人类肝脏蛋白质组 计划”，参加国际人类蛋白质组研究计划中的 “大规模抗体制备”项目 ? 思考 1 分离生物大分子的基本思路是什么？ 选用一定的物理或化学的方法分离具有 不同物理或化学性质的生物大分子。 思考 2 蛋白质的分离和提取的原理是什么？ 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的 形状和大小、所带电荷的性质和多少、 溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲 和力等等，可以用来分离不同蛋白质。 一、基础知识： ㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）： 1 、凝胶： 一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的 通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖， 具多孔的凝胶就叫分子筛） 2 、概念：根据被分离物质的蛋白质相对 分子质量的大小，利用具有网状结构的凝 胶的分子筛作用，来进行分离。 3 、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相 对（ 相对分子质量较小 ）的蛋白质容易进入 凝胶内部的通道，路程（ 较长 ），移动速 相对分子质量较大 度（ 较慢 ），而（ ）的蛋白 质无法进入凝胶内部的通道，只能在 （ 凝胶外部 ）移动，路程（ 较短 ），移动速 较快 ），相对分子质量不同的蛋白质因 度（ 此得以分离。 4 、具体过程 凝胶色谱法分离蛋白质的原理 ㈡ 缓冲溶液： 1 、概念：在一定的范围内，能对抗外 来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液 PH 发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具 有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。 2 、作用： 能够抵制（ 外界的酸或碱 ）的对溶液 的（ PH 值 ）的影响，维持 PH 基本不变。 3 、缓冲溶液的配制 通常由（ 1 － 2 ）种缓冲剂溶解于水 中配制而成。调节缓冲剂的（ 使用比例 ） 就可以制得（ 在不同 PH 范围内 ）使用的 缓冲液。 思考：说出人体血液中缓冲液。 NaH2PO4 / Na2HPO4 H2CO3 / NaHCO3 在血红蛋白整个实验室中用的缓冲 液是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模 拟细胞内的 PH 环境，保证血红蛋白的正 常结构和功能，便于观察（红色）和材 料的科学研究（活性） ㈢电泳： 1 、概念：指带电粒子在电场作用下发 生迁移的过程。 2 、原理：许多重要的生物大分子，如 可解离的基团 （ 多肽、核酸 ）等都具有 ( ) 在 ( ) 一定的 PH 下，这些基团会带上 （ 正电或负电 ） 。在电场的作用下，这些带 电分子会向着与其（ 所带电荷相反的电极 ） 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子 （ 带电性质的差异 ）以及分子本身 大小 （ ）、（ 形状 ）的不同使带电分子 产生不同的（ 迁移速度 ），从而实现样 品中各种分子的分离。 分类： 琼脂糖凝胶电泳和聚丙稀酰胺凝胶电泳。 测定（ 蛋白质相对分子质量 ）通 常用十二烷基硫酸钠（ SDS ） — 聚丙稀 酰胺凝胶电泳 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于 它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素。 为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶 SDS 。 SDS 能使蛋白质发生完全变性。 中加入 ( ) 由几条肽链组成的蛋白质复合体在 SDS 的作用 下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是 ( ) 。 SDS 能与各种蛋白质 单条肽链的分子量 形成蛋白质 — SDS 复合物， SDS 所带负电荷的 量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而 掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳 迁移率完全取决于 (