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iQ?5 多重实时荧光定量 PCR 仪简介 在现代分子生物学的发展过程中，核酸放大技术的出现及与之相关的检测技 术的成熟起到了至关重要的作用，而实时荧光定量 PCR 技术可以说是两者完美 的结晶。它通过加入能与 DNA 结合的荧光染料或在引物/探针上标记荧光基团等 方法，在 PCR 过程中，随着产物的量不断增加，荧光信号也随之发生相关性的 变化，再通过数学处理，算出原始靶 DNA 的含量。 实时荧光定量 PCR 技术可以在较大的动力学范围内实现精确定量，其灵敏 度也达到相当高的程度。随着这项技术的发展，其专用的实时荧光定量 PCR 仪 也应运而生。我们伯乐公司这次推出的 iQ?5 多重实时荧光定量 PCR 仪是在 iCycler 荧光定量 PCR 仪的基础上强化而成，以求性能达到最优。 iQ?5 多重实时荧光定量 PCR 仪所装配的光源（钨卤素灯）拥有更宽的光 谱范围，给予用户在其选择上最大限度的灵活性。经过优化的激发/发射透镜组 可以显著提高多重 PCR 的灵敏度，减少多重荧光之间的干扰。它的 CCD 检测 器可以同时监测 96 个反应孔的荧光数据。在热循环过程中，当前完整的实验数 R 据会被软件实时地以图解的形式表现出来。 实时的数据显示可以大大提高反应孔与孔之间数据比较的可靠性，iQ?5 多 重实时荧光定量 PCR 仪则可以方便地实现数据实时显示，有利于及时反馈试验 状况。以上介绍的各项特性保证了 iQ?5 多重实时荧光定量 PCR 仪在使用过程 中具有更强的可靠性和灵活性。 iQ?5 多重实时荧光定量 PCR 仪所配备的运行、分析软件设计得十分人性 化，且功能强大。其功能模块的界面模式可使用户可以快速地完成各种操作。当 用户把光标放在软件的功能键上时，其下方还会出现相应说明文字。此外，按键 盘的“F1”键还可以启动在线帮助指南。当用户设定完结果分析参数后，点一 键即可得到最终分析结果。 iQ?5 使用快速指南 2.1 如何用 iQ?5 运行一次实验 2.1.1 综述 创建、选择或修改一个反应程序文件（Protocol file） 创建、选择或修改一个反应板设置文件（Plate Setup file）。 R 点击“Run”键。 以选定的反应板设置文件和反应程序文件进行反应。 2.1.2 反应程序文件（Protocol file）设置指南 用户可以在 Workshop 模块中，创建一个新的反应程序文件，或是直接选择或修 改一个已有的反应程序文件。 选择一个已有的反应程序文件 点击“Protocol”键，在弹出的浏览器中选定所要选择的反应程序文件的路 径。 点击所需的反应程序文件的文件名，此时该文件的具体设置在“Selected Protocol”窗口中显示出来。 注意：iQ?5 软件安装后，里面会自带一些我们设置好的反应程序文件作为示例，用户可以直接调用它们。 R 创建或修改一个反应程序文件 在“Selected Protocol”窗口点击“Edit”键即可对当前的反应程序文件进行修 改； 在“Selected Protocol”窗口点击“Create New”键即可创建一个新的反应程 序文件。 无论点击“Edit”或“Create New”键，软件都会自动切入“Protocol Edit”窗 口。 这个窗口下部有一显示反应内容的表格，用户可以在其中按自己的需求进行修改。 修改保温时间和保温温度。 “Dwell Time”列设置保温时间，“Setpoint”列设置保温温度。如果用户要设置一个 10 秒的保温时间，那就要在相应格中输入 0：10 或者 0.10。 选择荧光数据收集步骤 “Data Acquisition”列用于设置荧光数据收集步骤。其中“Real-Time”选项用 于荧光定量，“Melt Curve”用于熔点曲线分析。 注意：如要进行荧光 PCR 实验，必须保证程序中至少有一个荧光数据收集步骤。 插入循环或步骤 在表格中“Cycle”列有数字显示的行，点击该行“Insert”列的“+”，即可完成 循环插入，系统默认插入的循环在当前循环之后。 在表格中“Step”列有数字显示的行，点击该行“Insert”列的“+”，即可完成 步骤插入，系统默认插入的步骤在当前步骤之后。 4. 删除循环或步骤 R 点击某 Cycle 行 “Delete”列的“×”，即可将该循环删除。 点击某 Step 行 “Delete”列的“×”，即可将该步骤删除。 文件保存 点击“Save and Exit Protocol Editing”键，在随后出现的“Save as”对话框中输入程序文件的名称，再点击“Save”键即可完成保存。 注意：点击“Save and Exit Protocol Editing”键或“Cancel an