DB15∕T 2033—2020 乳酸菌胞外多糖的分离纯化与鉴定技术规程(内蒙古自治区).pdf

2020-11-30 发布 2020-12-30 实施 发布 内蒙古自治区市场监督管理局 U 11 I c DB15/T 2033--2020 乳酸菌胞外多糖的分离纯化 与鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了乳酸菌胞外多糖的提取、分离、纯化与鉴定的方法与技术流程。 本文件适用于乳酸菌胞外多糖的提取、分离、纯化及鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件:不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件。 GB !T 32198 红外光谱定量分析技术通则 GB !T 36240 离子色谱仪 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件O 3. 1 乳酸菌 lactic acid bacteria(LAB) 一类能利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸、无芽于包、革兰氏染色细菌的总称。 3. 2 乳酸菌胞外多糖 lactic acid bacb .i" exopolysaccharide(LAB EPS) 乳酸菌在生长代谢过程中合成并分泌于且咆外或渗入培养基中的多糖及其泪合物。 3. 3 硫酸-苯酣法 sulfuric acid-phenol method 利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成把应1ìJ生物，然后与苯酣生成橙黄色化合 物，再以比色法测定。 3.4 离子交换层析 ion-exchange chromatography(IEC) 在一定pH 条件下，根据被分离样品所带电荷不同而进行的分离方法。可根据样品性质来选择合适 的离子交换介质C 3.5 ;Jl胶层析 gel filtration chromatography DB15/T 2033--2020 按照样品分子量大小进行分离的技术，又称j疑胶过滤、分子筛层析或排阻层析。通常使用Superdex 、 Surperose、 Sephacryl 、 Sepharose、 Sephadex等i~U交纯化介质C 3.6 紫外光谱 ultraviolet and visible spectrum(UV) 测定物质分子在紫外光区吸收光谱的分析方法。一般的紫外光谱是指近紫外区 (200 nm~380 nm) 的吸收光谱。 3. 7 红外光谱 infrared spectroscopy(TR) 分子能选择性吸收某些波长的红外线，检测红外线被吸收的情况可得到物质的红外吸收光谱，又称 分子振动光谱或振转光谱。通常所说的红外光谱即指中红外光谱 (2. 5μm~25μm) 。 3.8 离子色谱 ion chromatography 高效液相色谱(HPLC) 的一种，是利用被测物质的离子性分离和检测阴离子和阳离子的一种液相色谱 方法。 4 材料、仪器和试剂 4. 1 菌株材料 分离、保存并鉴定的乳酸菌菌株。 4. 2 仪器 数显电热水浴锅， 高压:去汽灭菌锅，生化培养箱，超高速低温离心机，真空低温冷冻干燥机，荧光 倒置显微镜，高效液相色1号仪， rti 白核酸纯化系统，高于色谱仪，红外光谱仪，多角度撒光检测器。 4. 3 试剂与耗材 4.3.1