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阴道念珠菌病检测与评价 摘要： 阴道真菌多为白色假丝酵母菌，偶见阴道纤 毛菌、放线菌等，使人类致病者 85％为白色念珠菌。阴道念 珠菌病的诊断要结合典型症状和体征及真菌学检查。培养和 镜检的敏感性和可靠性不同，前者达 90％，后者仅为 40％，涂片应取阴道后壁的分泌物 (如有菌丝中可确诊为感染而非 带菌 )。 关键词： 念珠菌；检测方法；质量控制 【中图分类号】 R446 【文献标识码】 B 【文章编号】 1672-8602(2014)03-0213-01 念珠菌病是由念珠菌引起的一种最常见的真菌病。最常 见的致病菌为白色念珠菌，常存在于正常人的口腔、皮肤、 阴道和消化道内，因此念珠菌病多为内源性感染，属条件致 病菌。阴道真菌有时在阴道中存在而无害，但在阴道抵抗力 减低时容易发病，真菌性阴道炎以找到真菌为诊断依据。阴 道真菌多为白色假丝酵母菌，偶见阴道纤毛菌、放线菌等， 使人类致病者 85％为白色念珠菌。 临床资料 2012 年 6 月～ 2013 年 6 月选取 60 例妇科门诊送检的 阴道分泌物，患者年龄最小 18 岁，最大 53 岁，平均年龄 38 岁。 检测方法 2.1 采集 :阴道标本采集前 24 小时，禁止性交、盆浴、 阴道检查、阴道灌洗及局部上药等，以免影响检查结果。取 材所用消毒的刮板、吸管或棉拭子必须清洁干燥，不粘有任 何化学药品或润滑剂。阴道窥器插入前必要时可用少许生理 盐水湿润。根据不同的检查目的可自不同部位取材。一般采 用盐水浸湿的棉拭子自阴道深部或阴道后部、宫颈管口等处 取材，制备成生理盐水涂片以观察阴道分泌物 [1] 。用生理盐 水悬滴可检查滴虫， 涂制成薄片以 95％乙醇固定， 经过巴氏 染色、姬姆萨染色或革兰染色，进行肿瘤细胞筛查或病原微 生物检查。 2.2 湿片检查 :同阴道滴虫检查。必要时于涂片上加 1 滴 2.5mol ／ L KOH 溶液，混匀并加盖玻片， 低倍镜下可见到白色假丝酵母菌的卵圆形孢子和假菌丝，再用高倍镜确认。 高倍镜下查见单个或成群呈卵圆形、无色透明的孢子，常为 芽生或多个连成链状、分枝状，即可报告 查到真菌 。如取阴道分泌物涂片并进行革兰染色后油镜观察，可见到卵圆形 革兰阳性孢子或与出芽细胞相连接的假菌丝，呈链状及分枝状。本法简便易行，是目前临床上最常用的方法。 2.3 浓集法检查 :取标本于清洁干燥试管内，加2.5mol ／L NaOH 溶液约 1ml ，混匀后置 37℃水浴中 3～ 5min，取 出低速离心 5min ，取沉淀物作涂片镜检， 可提高阳性检出率。 2.4 培养法 :将分泌物接种于真菌培养基 (如沙保弱培养 基)进行分离培养， 根据培养特征、 形态，以及菌落涂片镜下见到的假菌丝和芽生孢子进行诊断。本法阳性率高，可分离 出感染的菌株，但操作复杂、费时，临床应用较少。 3 培养与鉴定 在沙氏培养基上生长情况，于 25℃或 37℃培养都能生 长，呈闪光、软而平滑、高出培养基表面、奶油色、酵母样 菌落。陈旧的菌落颜色发深，逐渐变硬，并有皱褶，中央可 见气泡，没有气中菌丝，营养菌丝丰富。镜检有假菌丝和大 量芽生孢子。在葡萄糖蛋白胨液体培养基上生长情况：于 37℃培养 48h，白色念珠菌呈管底生长，无菌膜。在血清培 养基上生长情况： 将纯培养的念珠菌接种到 0.5ml ～1.0ml 正 常人或羊血清中，于 37℃孵育 0.5～ 3h，白色念珠菌产生芽 管，芽管长为细胞的 3～ 4 倍，末端的宽度为细胞的 1／ 2[2] 。 在玉米吐温－ 80 琼脂培养基上生长情况：于 25℃孵育 24h， 白色念珠菌形成许多树枝状菌丝及顶端厚壁孢子。在葡萄糖 蛋白胨琼脂中加入 0.005％氯化三苯基四氮唑 (TZC) ，白色念 珠菌不变色或仅呈淡红色，其他念珠菌或酵母菌变为红色， 热带念珠菌最为明显，呈深红色或紫色。用生理盐水制成待 检菌悬液，加于无碳源的培养基中，混匀，倒入平皿内，凝 固备用。在平皿培养基中贴附各种碳源的滤纸片 ( 直径 6mm 滤纸片，灭菌后吸入 10％碳源溶液，放 37℃温箱蒸干 )，置 25℃～ 28℃培养两天观察结果。凡能同化者，在相应的碳源 周围可见有一明显生长圈。 质量控制 阴道分泌物检查，是女性泌尿生殖系统疾病诊断常做 的检查。主要为各种阴道炎、性传播疾病等的诊断提供重要 依据。因此，应把好标本的采集送检关，严格控制质量，保 证结果的准确性。熟练掌握湿涂片中出现的正常和异常成分 的形态及数量变化的意义，如红细胞、成堆的白细胞、真菌 和阴道滴虫等在高倍视野的形态变化特征，以高倍视野报告 结果，报告应力求准确可靠。 取阴道分泌物时应停外用药 2～ 3d，以提高阳性检出率。如所用玻璃器材应干净；涂片做到 取材统一或定量，检查及时，观察标准一致