石蜡包埋组织中4种dna提取方法的比较研究_张旭垠.docxVIP

中国妇幼健康研究 2007年第 18卷第 4期 291 石蜡包埋组织中 4种 DNA 提取方法的比较研究 张旭垠,易晓芳 ,丁景新, 丰有吉 (复旦大学附属妇产科医院妇科, 上海 200011) 摘 要] 目的 探讨石蜡包埋组织中提取 DNA 的简易有效方法。 方法 取我院 2003年肿瘤细胞减灭术切除的 10%甲醛固定石蜡包埋的上皮性卵巢癌标本 20例, 分别以一步法、氯化钠盐析法、酚氯仿抽提法、试剂盒法提取其 DNA, 然后进行电泳和聚合酶链反应扩增分析。 结果 酚氯仿抽提法所得样本 DNA 的产量为 55. 12 ±8. 81μg, 氯化钠盐析法为 58. 39 ±5. 76μg, 两者比较无显著差异(P 0. 05), 但分别和另外两组相比有显著差异(P 0. 001);酚氯仿抽提法所得样本 DNA的 OD 260 /OD 280比值 1. 81 ±0. 16, 氯化钠盐析法为 1. 84 ±0. 18, 两者比较无显著差异(P 0. 05), 但分别和另外两组相比有显著差异(P 0. 01);酚氯仿抽提法, 氯化钠盐析法所得 DNA 产量和质量均高于一步法和试剂盒法。 结论 蛋白酶 K 消化氯化钠盐析法简便快捷, 不用接触有毒的化学药品 , 是理想的石蜡包埋组织 DNA 提纯方法。 关键词] DNA提取;聚合酶链反应;石蜡包埋组织;氯化钠盐析法 [ 中图分类号] R 737. 31;R 73-3 [ 文献标识码] A [ 文章编号] 1673 - 5293(2007)04 - 0291 - 03 Comparison of differentm ethods for extraction of DNA from paraffin-embedded tissues ZHANG Xu-yin, Y IX iao-fang, D ING Jing-xin, FENG Y ou-ji (Departm ent of G ynecology, The A ffiliated Obstetrical and Gynecolog ica lH ospita l of Fudan University, Shanghai 200011, China) [ Abstract] Objective T o explo re an optim al m ethod for ex traction o f DNA from pa ra ffin-em bedded tissues. M ethods Tw en ty fo rm alin- fixed, para ffin-em bedded ep ithe lia l ova ry cancerous tissue specimen w ere se lec ted and div ided in to four groups acco rding to the me thod for DNA ex trac tion. Four m ethods inc luded one-step m e thod, sa lting-out pro cedure, conventional pheno -lch lo rofo mr ex traction m e thod and genom ic DNA purification kit. The qua lity o f ob ta ined DNA wa s ana ly zed by e lectropho resis and PCR amp lification. Results The pu rity and y ield o f DNA ex tracted by sa lting-ou t p rocedure m ethod and conventiona l pheno -lch lo rofo rm m e thod w ere be tter than one-step m ethod and genom ic DNA purification kit. Conclusion P ro te inase K digestion salting-outm e thod is an optim alm e thod fo r ex trac tion o f DNA from paraffin-embedded tissues. [ Key w ords] DNA ex trac tion;PCR;paraffin embedded tissue;N aC l salting-out me thod 1985年 G oelz等首次成功地从甲醛固定石蜡包埋组织中提取出了 DNA 之后, 国外许多学者对石蜡包埋组织提取 D