Brdu-细胞增殖检测实验实训 .doc

Brdu检测细胞增殖实验 实验操作: 铺细胞，每个3.5cm dish 10万个，在37℃、5%CO2孵箱中培养72h（细胞密度至50-60%左右）。 Brdu（5-溴-2′-脱氧尿苷）加入培养细胞中，1mg/ml，标记48h。(量：Brdu以铺满整个dish底面为准。) 固定：PBS洗细胞爬片3次，每次5min，在摇床上晃动清洗，4%PFA固定30min。 变性：将固定好的细胞爬片用PBS洗3次，每次5min，2mol/L的HCl在37℃条件下变性5min，可放置于37℃恒温孵箱，应用封口膜把培养皿封好。（120r/m） 中和：0.1mol/L的硼酸钠（PH8.3）中和10min，PBS洗3