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保健食品中盐酸硫胺素盐酸吡哆醇烟酸烟酰胺和咖啡因的 测定 Determination of thiamine hydrochloride,pyridoxine hydrochloride,niacin,niacinamide and coffeine content in health food 1范围 本方法规定了保健食品中盐酸硫胺素、 盐酸吡哆醇、烟酸、 烟酰胺和咖啡因含量的高压液相色谱测定方法。 本方法适用于盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺 和咖啡因作为膳食补充剂添加于片剂、胶囊、口服液、饮料 等试样类型中含量的高压液相色谱测定。 本方法的最低检出量为盐酸硫胺素 0.4mg/kg、盐酸吡哆 醇0.4mg/kg、烟酸 2.0mg/kg、烟酰胺 1.2mg/kg、咖啡因 1.0mg/kg。 本方法的最佳线性范围： 盐酸硫胺素0.500?50.0卩g/mL 盐酸吡哆醇0.500?50.0卩g/mL 烟酸1.00?100卩g/mL 烟酰胺1.00?100卩g/mL 咖啡因5.00?500卩g/mL 2原理 将粉碎混匀的片剂、胶囊或液体试样使用甲醇：水：磷 酸=100: 400: 0.5进行提取和稀释，根据高压液相色谱紫外 检测器外标法定性定量检测。 3试剂 甲醇 优级纯。 乙腈 色谱纯。 磷酸 分析纯。 硫酸月桂酯钠(Sodium Dodecylsulfate ) 高压液 相色谱用离子对试剂 3.5 1- 癸烷磺酸钠(Sodium 1-Decanesulfonate )高压液 相色谱用离子对试剂。3.6 标准储备液A准确称量已扣除 水分的盐酸硫胺素和盐酸吡哆醇标准品各 0.0500g，溶于水 中并定容至50mL。 标准储备液 B准确称量已扣除水分的烟酰胺和烟酸 标准品各0.0400g，溶于水中并定容至 20mL。 混合标准使用液 准确称量经80C干燥4h的咖啡因 0.0500g，准确加入标准储备液 A 5mL,标准储备液 B 10mL, 再加入甲醇：水：磷酸 =100： 400: 0.5混合溶液 4仪器和设备 高效液相色谱仪： 附紫外检测器（UV）O 超声波清洗器。 离心机。 5分析步骤 5.1 试样处理 取20粒以上片剂或胶囊试样研磨或混匀，称取一定 量试样于试管中（准确至 O.OOIg ）,加入甲醇：水：磷酸= 100: 400: 0.5混合溶液，使浓度为每毫升中大约含盐酸硫胺 素、盐酸吡哆醇0.25mg，烟酸、烟酰胺1m?超声提取5min 后以3000rpm/min离心5min，上清液经0.45」m滤膜过滤后 待进样。 液体试样直接以甲醇：水：磷酸= 100: 400: 0.5混 合溶液稀释，充分混匀后经 0.45」m滤膜过滤后待进样。 色谱条件 5.2.1 色谱柱：液体试样 TSK C18 4.6 X 150mm 柱温：室温 检测波长：盐酸硫胺素 260nm 咖啡因、烟酸、烟酰胺、盐酸吡哆醇 280nm 流动相：盐酸硫胺素：硫酸月桂酯钠溶液（5-530）: 乙腈:磷酸=530:470:1 咖啡因、烟酸、烟酰胺、盐酸吡哆醇 ：1- 癸烷磺酸钠溶液（1.22 - 850） 乙腈:磷酸=850:150:1 流速：1mL/min 进样量：104 5.3 保 留 图2在该色谱条件下，盐酸硫胺素（图1- 图2 在该色谱条件下，盐酸硫胺素（图 1- 1）保留时间14.305 咖啡因（图2- 1）保留时间4.986、烟酸（图2-2）保留时 间8.728、烟酰胺（图2-3）保留时间9.341、盐酸吡哆醇 （图2-4）保留时间18.512。 5.4分析结果表示 5.4.1计算 iX C x V 2X mX 1000 式中：X —试样中单一成分的含量， mg/g (mL ; h 1—试样峰高或峰面积； C —标准溶液浓度，卩g/mL; V —试样定容体积，mL; h 2—标准溶液峰高或峰面积； m —试样量，g (mL。 5.4.2结果表示 检测结果保留三位有效数字。 6技术参数 准确度 方法的回收率在 91.2%?102.5%之间 允许差平行测定相对误差乞土 10%