生化与分子生物学研究思路与技术课件.pptVIP

8. 基因组文库构建: 基因组文库(genomic DNA library)是含有某种生物全部基因随机片段的重组DNA克隆群体。 提纯染色体DNA，通过机械剪切或酶切使之成为一定大小的片段，并与适当的载体DNA连接和转染宿主菌，得到一组含有不同DNA片段的重组分子。 9. cDNA文库构建: cDNA是指以mRNA为模板，由逆转录酶催化形成的互补DNA（cDNA），其核苷酸序列完全互补于模板mRNA链；再以cDNA为模板，由DNA聚合酶合成第二链，得到互补双链DNA。 将双链cDNA产物与载体（质粒或噬菌体）DNA重组，并转化到宿主细菌或包装成噬菌体颗粒，得到重组克隆混合体。每个克隆含单独一种cDNA (mRNA)分子，克隆总和则包含细胞的全部mRNA信息。 cDNA文库(cDNA library): 10. 文库筛选: 文库筛选方法： 核酸分子杂交、免疫学方法等。 通过文库筛选，可以获得全长基因、分离出对应稀有mRNA的cDNA片段及鉴定目的重组子等。 11. 报告基因检测: 报告基因(reporter gene)是指那些表达产物容易被检测的基因。利用基因重组技术，将待检测的DNA片段插入报告基因表达载体中报告基因的上游，然后转染合适的细胞并表达，通过测定报告基因的表达产物，即可推测出该DNA片段在基因表达调控中的作用。 12.