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戊型肝炎病毒 IgM 抗体定量测定 作业指导书 项目中英文名称： 戊型肝炎病毒 IgM 抗体检测试剂盒 (磁微粒化学发光法 ) HEV IgM CLIA Microparticles 实验原理与方法： 1 原理： 采用捕获法原理进行检测。 用抗人 IgM 抗体包被磁微粒， 辣 根过氧化物酶标记 HEV 抗原制备酶结合物。通过免疫反应 形成固相二抗 -抗体 -酶标抗原复合物，该复合物催化发光底 物发出光子，发光强度与 HEV IgM 抗体的含量成正比。 2 方法：捕获法 标本的要求： 3.1. 应用正确医用技术收集血清或血浆样本。血浆样本推荐 使用 EDTA 、肝素、枸橼酸钠抗凝管采集。 3.2. 样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心 除去。 3.3. 严重溶血、脂血或浑浊的样本不能用于测定。 3.4. 样本收集后在室温放置不可超过 8 小时；如果不在 8 小 时内检测需将样本放置在 2~8℃的冰箱中； 若需 48 小时以上 保存或运输，则应离心提取血清或血浆后冻存于 -20℃以下， 避免反复冻融。使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。 4 仪器： 适用于 AutoLumo A2000 系列发光仪。 5.试剂厂家及名称： 郑州安图生物工程股份有限公司 6.操作步骤： 6.1、消耗品检查： 根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。 参考相应的仪器系统操作说明。 6.2、试剂包装载： 试剂包首次上机前，轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂 包内的成分， 避免产生气泡。 不要倒转已经打开的试剂包。 仪器通过扫描试剂包条码自动获取测试所需的参数。 如果特殊情况下仪器无法识别条码，可以手工输入。 参考相应的仪器系统操作说明。 6.3、测试： 将样本容器放置在仪器配套样本架中，每次测试样本量为 10μl。 装载样本架，在仪器软件界面中输入样本信息。 选择 “运行 ”开始测试，系统自动进行试验操作。 参考相应的仪器系统操作说明。 6.4、定 Cutoff 值 仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数。 如果特殊情况下仪器无法识别条码卡，可以手工输入。 将阴阳性对照转移至样本容器， 放置在仪器配套样本架中。 ? 装载样本架，在仪器软件界面中输入 Cutoff 值信息。 ? 选择 “运行 ”开始测试，生成 Cutoff 值。 Cutoff 值有效期为 28 天。 参考相应的仪器系统操作说明。 出现以下情况需要重新生成 Cutoff 值： 质控结果经重复测定后仍然超出范围； 试剂盒或发光底物液的批号更改； 超出 Cutoff 值有效期限； 仪器重要部件更换或维修。 6.5、质控： 使用至少两个分析物水平的质控品进行质控。 出现以下情况需要进行质控： 测试试剂盒使用超过 24 小时； 更换新的试剂盒； 重新生成 Cutoff 值； 停机。 各实验室需根据自身情况建立适合本实验室的可接受范围，以确保合适的测试性能。 质控值应落在规定的范围内，如出现失控，应采取纠正措施。 6.6、稀释 使用手工稀释或仪器自动稀释功能。 手工稀释使用系统通用样本稀释液进行稀释，将得到的检测结果乘以稀释倍数计算最终结果。 选择仪器自动稀释功能，可以得到准确的检测结果，参考相应的仪器系统操作说明以及帮助系统。 6.7、测试步骤 1）在反应容器（以下简称“孔”  ）中依次加入阳性对照  3 孔 （用于定  Cutoff  值），阴性对照  2 孔，各  110μl/ 孔；其余孔中 每孔分别加入  100μl 样品稀释液和  10μl 样本。 2）每孔分别加入磁微粒混悬液 20μl。 3）混匀后 37℃温育 15 分钟。 4）洗液洗涤 5 次。 5）每孔分别加入酶结合物 50μl。 6）混匀后 37℃温育 17 分钟。 7）洗液洗涤 5 次。 8）每孔加入发光底物 A 和发光底物 B 各 50μl。 9）混匀后 1～ 5 分钟检测发光强度。 参考值 7.1. Cut off 值 =阳性对照孔平均发光值 *0.15 ； 7.2. 阳性对照孔平均发光值 /阴性对照孔平均发光值大于 10； 7.3. 阳性对照各孔相对发光强度 CV% 不超过 10%（如 CV% 超过 10%，则删除不平行点直到 CV% 小于 10%或重新实验） 。 7.4. S/CO=待测样本发光值 / Cutoff 值； S/CO≥1.00 时，结果判为阳性； S/CO＜ 1.00 时，结果判为阴性。 8．检验结果的解释： 8.1. 用本试剂盒检测结果为临界值附近等可疑样本，建议 重新测定，动态观察。 8.2. 由于方法学或免疫特异性等原因， 使用不同生产商的试 剂对同一份样本进行检测可能会得到不同的检测结果， 因此不同试剂检测所得结果不应直接相互比较， 以