生物制药工艺 谷胱甘肽的发酵制药 谷胱甘肽的发酵制药.pptxVIP

生物制药工艺课程谷胱甘肽的发酵制药GSH的简介及结构 谷胱甘肽（glutathione）是一种由3个氨基酸组成的短肽，存在于几乎身体的每一个细胞中，但是谷胱甘肽必须在有产生的细胞及其前体（Vc和α-硫辛酸）的条件下才可以有效地在人体内工作，谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统的功能，在细胞中，谷胱甘肽主要发挥抗氧化剂的作用。 谷胱甘肽由谷氨酸，半胱氨酸和甘氨酸组成，分子中半胱氨酸的-SH是主要的功能性基团。 谷胱甘肽广泛分布于自然界的生物体中(Wierzbicka等，1989)，主要存在于酵母、动物肝脏、肌肉、血液中，许多植物，如蔬菜、豆类、谷物、薯类、菇类及细菌中也含有一定量的谷胱甘肽。谷胱甘肽的氧化与还原谷胱甘肽的理化性质 晶体呈无色透明细长粒状，溶于水、稀醇、液氨和二甲基甲酞胺，而不溶于醇、醚和丙酮。谷胱甘肽固体较为稳定，而水溶液在空气中则易被氧化，两分子还原型谷胱甘肽(GSH）的活泼巯基氧化缩合为二硫键，即得到氧化型谷胱甘肽（GSSG）。 谷胱甘肽分子量为307．33，熔点189～193℃(分解)，晶体是无色透明细长柱状(板状)，等电点(PI)为5．93，成品见光易分解，易氧化。 在氧化型谷胱甘肽和还原型谷胱甘肽中，只有还原型谷胱甘肽才具有生理活性，而生物体内的氧化型谷胱甘肽需要还原后才能发挥其重要的生理功能。因此，我们在提取谷胱甘肽时，可以在溶液中加入具有强还原性的物质如维生素C等，当存在这些强还原性的物质时可以保护谷胱甘肽不容易被氧化。GSH的生理功能1.抗自由基,保护细胞2.解除外源性有毒物质(包括药物)的毒性3.促进细胞合成蛋白质4.参与转甲基、转丙氨基反应,维持肝细胞正常功能5.参与胆红素代谢6.促进胆酸代谢,减轻出血倾向7.是多种酶的辅基或辅酶GSH在疾病上的应用易与碘乙酸、芥子气（一种毒气）、铅、汞、砷等重金属盐络合，也能与某些药物（如扑热息痛）、毒素（如自由基、重金属）等结合，把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排泄出体外。 GSH与溶血性疾病的治疗。保护红细胞膜上的巯基免遭氧化物的损害，保护红细胞膜的完整性，从而维持红细胞的正常的结构与功能。GSH与糖尿病的治疗。SH参与葡萄糖诱导的胰岛素分泌，血浆中GSH/GSSG的比率可影响细胞对葡萄糖的反应性，此比率的增加可改善糖尿病患者外周胰岛素的作用提高血液中GSH的水平，减少氧化损伤的程度和增加胰岛素的敏感性。还参与肝炎、角膜炎、白内障及视网膜疾病动脉粥样硬化病的治疗。 生产成本和研究进展 目前，国内市场上还原型谷光甘肽的原料药价格在4000元/kg以上，而谷胱甘肽的生产成本约1500元/kg左右 谷胱甘肽的生产方法主要有化学合成法、酶转化法和发酵法。目前，化学合成法和提取法已经工业化，酶转化法正在进行广泛研究，尚未用作GSH的工业化生产。微生物发酵法用于谷胱甘肽的生产是当前世界上主要的生产方法，国外谷胱甘肽的主要产地在日本，国内谷胱甘肽的研究起步较晚，现在主要还是在一些研究院校内，处于研究阶段，没有形成一定的生产规模。谷胱甘肽的生产工艺·萃取法 萃取法经常用于从高含谷胱甘肽的动植物组织中提取谷胱甘肽的一种常用方法，也是生产谷胱甘肽的经典方法。 ·化学合成法 基础原料均用的是谷胱甘肽化学式中的三种主要成分即谷氨酸，半胱氨酸和甘氨酸。·酶法 利用生物体含有谷胱甘肽合成酶L一谷氨酸．L一半胱氨酸及甘氨酸为底物，并加少量三磷酸腺苷即合成谷胱甘肽。·发酵法 谷胱甘肽在1888年，由deRey-Pailhade从酥母中分离出谷胱甘肽以后，谷胱甘肽从酵母中提取的工艺也越来越成熟，并且已经成为目前生产谷胱甘肽普遍采用的方法。酵母发酵法生产谷胱甘肽工艺流程图 诱变剂→酵母→高产酵母→热水抽提→离心→调PH值→树脂吸附→酸洗脱→新鲜的CuO沉淀→离心沉淀物→H2S置换→离心过滤→浓缩→脱色→喷雾干燥→成品菌种的选育：酵母菌 选育抗乙硫氨酸突变株：γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶是催化谷胱甘肽合成的主要酶。他受谷胱甘肽的反馈抑制，乙硫氨酸是谷胱甘肽的结构类似物，低浓度时促进谷胱甘肽的合成，高浓度时要抑制细菌生长和谷胱甘肽的合成。 选育抗锌离子的突变株：zn是多种脱氢酶，脱羧酶和肽酶的辅因子，在低浓度时促进细菌生长，当达到一定浓度时能使谷胱甘肽还原酶活性中心变构失活，抑制胞内谷胱甘肽的继续合成。培养基： 碳源：葡萄糖 蔗糖 糖蜜 葡萄糖是最佳碳源。 氮源：牛肉膏 蛋白胨 酵母膏 牛肉膏是最佳氮源。单一氮源对细胞生长和谷胱 甘肽的产量明显优于有机氮源，混合无机氮源对谷胱甘肽的产量有明显的提高。 无机盐离子：微生物在缺乏Mg时，不能合成谷胱甘肽；Mg过量会抑制谷胱甘肽的合成。在10mmol/L时，产量达到最大。发酵条