大肠杆菌感受态细胞的制备及转化.pdf

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2021-02-10 发布于广东
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大肠杆菌感受态细胞的制备及转化.pdf

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大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 1 实验背景 1 实验背景限制缺陷型重组整合缺陷型受体细胞具备的较高的转化效率条件遗传互补性感染缺陷型 1 实验背景  类型原核细胞大肠杆菌哺乳动物受体细胞细胞真核细胞酵母细胞昆虫细胞 1 实验背景  pETBlue-2适用于克隆的受体细胞受体细胞 NovaBlue JM109 DH5a lacZ△M15 1 实验背景  蓝白斑筛选（α-互补） ω片段（无活性，宿主） + β-半乳糖苷酶（活性） α片段（无活性，载体） + -半乳糖苷酶 X-gal 半乳糖 + 5-溴-4-氯靛蓝深蓝色 X-gal：5-溴-4-氢-3-吲哚- β-D-半乳糖苷 IPTG：异丙基硫代 β-D-半乳糖苷 1 实验背景细菌处于容易吸收外源DNA的状态细菌表面正电荷增加感受态细胞壁和膜的通透性增加大肠杆菌感受态摄取DNA是非选择性的敏感细胞 1 实验背景  转化: 大肠杆菌捕获质粒DNA的过程  转化发展 F. Griffith M. Mandel与A. Higa 肺炎双球菌转化 CaCl ，大肠杆菌转化 2 1928年 1970年 1944年 1972年 O. T. Avery S. N. Cohen