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实验二十 叶绿素含量的测定 叶绿素的含量与植物光合作用及氮素营养有密切的关系， 在科学施肥、 育种及植物病理研 究上常有测定的需要。 方 法 Ⅰ 一、 目的 掌握叶绿素含量测定的基本原理和方法。 二、原理 叶绿素与其他显色物质一样， 在溶液中如液层厚度不变则其吸光度与它的浓度成一定的比 例关系。已知叶绿素 a 、b 在 652 nm 波长处有相同的比吸收系数（均为 34.5 ）。因此，在此波 长下测定叶绿素溶液的吸光度，即可计算出叶绿素 a 、b 的总量。 三、材料、仪器设备及试剂 1. 材料： 菠菜叶；芥菜叶或其他植物叶片。 2. 仪器设备： 电子分析天平；分光光度计；漏斗； 25ml 容量瓶；剪刀；滤纸；玻棒等。 3. 试剂： 95 ﹪乙醇、石英砂、碳酸钙粉。 四、实验步骤 1. 叶绿素的提取 称取植物鲜叶 0.20g （可视叶片叶绿素含量增减用量） ，剪碎放入研钵中， 加少量碳酸钙粉 和石英砂及 3～5ml95 ﹪乙醇研成匀浆， 再加约 10ml 95 ﹪乙醇稀释研磨后， 用滤纸过滤入 25ml 容量瓶中，然后用 95 ﹪乙醇滴洗研磨及滤纸至无绿色为止，最后定容至刻度，摇匀，即得叶 绿素提取液。 2. 测定 取光径为 1cm 的比色杯，倒入叶绿素提取液距杯口 1cm 处，以 95 ﹪乙醇为空白对照，在 652 nm 波长下读取吸光度（ A ）值。 五、计算 将测得的吸光度 A 652 值代入公式 (1), 即可求得提取液中叶绿素浓度。 所得结果再代入公式 － 1 (2) ，即可得出样品中叶绿素含量（ mg ·g Fw ）。 A 652 － 1 C ( mg ·ml ) = ———— ……………………………………………………（ 1） 34.5 公式中： C — 叶绿素 （a 和 b ）的总浓度 ( mg ·ml－ 1 ) 50 A 652 — 表示在 652nm 波长下测得叶绿素提取液的吸光度 34.5 为叶绿素 a 和 b 混合溶液在 652nm 波长的比吸收系数（比色杯光径为 1cm, 样 － 1 品浓度为 1g ·L 时的吸光度） 。 C （mg ·ml－ 1） × 提取液总量（ ml ） － 1 叶绿素含量（ mg ·g Fw ）= ———————————————— ……（ 2） 样品鲜重（ g ） 方 法 Ⅱ 一、 目的 掌握叶绿素 a、b 含量测定的基本原理和方法。 二、原理 叶绿素 a、b 分别在 663nm 和 645nm 波长处有最大的吸收峰，同时在该波长处叶绿素 a.、 b 的比吸收系数 K 为已知，我们即可以根据 Lambert － Beer 定律，列出浓度 C 与吸光度 A 之 间的关系式： A 663 = 82.04 Ca + 9.27C b ………………