干扰载体构建SOP[参照].docxVIP

文档收拾 | 学习参阅 collection of questions and answers shRNA搅扰载体构建SOP 目录 榜首部分 RNA搅扰原理及shRNA规划4 第二部分 酶切与收回7 第三部分 退火与衔接9 第四部分 转化与涂平板11 第五部分 挑菌与菌液PCR13 第六部分 质粒提取15 榜首部分 RNA搅扰原理及shRNA规划 规范操作规程(SOP) 意图：了解RNA搅扰原理，规划shRNA搅扰序列 仪器与设备：需求能够衔接Internet的个人计算机，引物规划相关软件(如Primer Premier 5)。 操作进程 RNA搅扰原理 RNAi概述： RNA搅扰（RNA interference, RNAi）是指在进化进程中高度保存的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。简略的说是指一种分子生物学上由双链RNA诱发的基因缄默沉静现象。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而导致基因表达缄默沉静，是一种特异性的转录后基因缄默沉静(post-transcriptional gene silencing)。因为RNAi具有高度的序列专一性和有用的搅扰，能够特异地将特定的基因缄默沉静，然后取得基因功用丢失或基因表达量的下降，因而能够作为功用基因组学的一种强有力