第十五、十六讲 翻译系统.ppt

第七章 遗传密码和遗传信息的翻译系统;二、三联密码的证实;;它们只能在B菌株上生长形成噬菌斑 开始用原黄素诱导的突变称FCO， 他们再用原黄素诱导产生回复突变，在E.coli K（λ）菌株中出现了噬菌斑。 用遗传学的方法和野生型杂交发现它们并不是真正的野生型。 校正突变（A suppressor mutation）抵消或抑制了前一次突变的效应，;;校正突变的特点如下：;;;mRNA上的3个碱基作为一个密码子（codon），头3个就读成第一个字。当原黄素诱导使DNA上的增加或减少了单个碱基将会使阅读框移动，导致“错误”，这样的移框突变可能导致遗传信息变成“无义”的。若第二次诱变相应地插入或缺失一个碱基可以恢复正确的阅读框。 　 通过这样的方法发现加入或减少一个和二个碱基都会引起移码突变，而加入或减少3个碱基时反而可以恢复正确的读框，表明每个密码的确是由3个碱基组成的。;Crick对遗传密码提出了4个特点：①3个碱基一组，编码一个氨基酸②密码是不重迭的（实验证据来自Wittmann等的实验及Tsugita A.，Fraenkel-Conrat H用亚硝酸诱发烟草花叶病毒TMV产生的突变体的研究中得到的）；③碱基的顺序是从固定起点解读的,即mRNA具有固定的阅读框；④密码子是简并（degeneracy）的,即某个特定的氨基酸可以由几个密码子来编码。;三.利用突变来解读密码;四.无细胞系统的建立; 他们的方法是: (1) 去模板：用DNAase处理E.coli抽提物，使DNA降解，除去原有的细菌模板。 (2) 加入pol U：合成了多聚苯丙氨酸， 这一结果不仅证实了无细胞系统的成功，同时还表明UUU是苯丙氨酸的密码子。 分别加入polyA，polyC 和polyG 结果相应地获得了多聚赖氨酸，多聚脯氨酸和多聚甘氨酸。; (3) 按比例加入２种核苷混合的多聚物 由于当时还未分离RNA pol酶，无法按设计的模板来合成RNA，Nirenberg又想出了一种新的方法，就是按一定的碱基比例来合成RNA。 比如在底物中加5份的UDP和1份的GDP， 碱基比为U：G＝5：1， 它们能组成8种三联体： UUU，UUG，UGU，GUU， GGG，GGU，GUG，UGG。 U和G将随机地加入到三联体中，这样按比例各个位点上进入U和G 的概率不同。;如UUU：UGG＝（5?5?5）:（5?1?1） ＝ 25 ： 1 同理UUU：UUG ＝5 ：1， 根据检测结果推测: 苯丙氨酸（UUU）：半胱氨酸（UGU） ＝ 5 ： 1 苯丙氨酸（UUU）：缬氨酸（GUU） ＝ 5 ： 5 苯丙氨酸（UUU）：甘氨酸（GGU） ＝ 24 ： 1 ;五.三联体结合实验;;六. 利用重复共聚物破译密码;;;第二节 遗传密码的证实和特点;;;二．遗传密码在纤毛虫和线粒体中的改变;三. 遗传密码的特点;表示第三个碱基摆动的模式。在八成员组成的密码子家族中，每个成员的四个密码子意思相同，那么第三个碱基U、C、A、G对氨基酸起不到特异的作用。在七个成员组成的密码子的意思相同。第三个碱基都是Py，含U或C。在五个成员组成的密码子家族中，每个成员的二个密码子都是相同的，第三碱基都是Pu，含A或G 。由一个成员组成的密码子家族中，有3个密码子的意思相同，第三个碱基含有U、C和A。 ;摆动假说(wobble hypothesis)是由Crick.F（1966年）提出的。即当tRNA的反密码子与mRNA的密码子配对时前两对严格遵守碱基互补配对法则，但第三对碱基有一定的自由度可以“摆动”。摆动假说也称为三中读二（2 out of 3 reading）。 ;三中读二一般可分为三种情况： (1) 第１,２两个碱基形成６个氢键时，可三中读二。 如ＣＣＸ，ＣＧＸ，ＧＣＸ和ＧＧＸ。 (2) 第1 ,2两个碱基形成4个氢键时,不可三中读二。 如AAX，ＡＵＸ，ＵＡX 和ＵＵＸ。 (3) 第１，２两个碱基形成５个氢键时, 当第二个碱基为嘧啶时，可三中读二； 如ＵＣＸ，ＡＣＸ，ＣＵＸ和ＧＵＸ。 当第二个碱基为嘌呤时则不能三中读二， 如ＣＡＸ， ＧＡＸ，ＵＧＸ和ＡＧX。 ;第三节 tRNA的结构和功能;（3）TψC常由5bp的茎和7Nt和环