化学发光免疫分析技术原理简介精.pdf

化学发光免疫分析技术原理简介 20 世纪 60 年代即有人利用化学发光法测定水样中细菌含量和菌尿 症患者尿液检查。 1977 年 Halman 等将化学发光系统与抗原抗体反 应系统相结合， 创建了化学发光免疫分析法， 保留了化学发光的高度 灵敏性，又克服了它特异性不足的缺陷。 近年来对技术与仪器的不断 改进，使此技术已成为一种特异，灵敏，准确的自动化的免疫学检测 方法。 1996 年推出的电化学发光免疫技术，在反应原理上又具有一 些新的特点。这两种技术目前已在国内一些大型医院实验室用于常规 免疫学检验。 一、化学发光免疫分析法 化学发光免疫分析法 ( chemiluminescence immunoassay , CLlA) 是把 免疫反应与发光反应结合起来的一种定量分析技术， 既具有发光检测 的高度灵敏性，又具有免疫分析法的高度特异性。在 CLIA 中，主要 有两个部分， 即免疫反应系统和化学发光系统。 免疫反应系统与放射 免疫测定中的抗原抗体反应系统相同化学发光系统则是利用某些化 合物如鲁米诺 ( luminol) 、异鲁米诺 (isolu-minol) 、金刚烷 ( AMPPD) 及吖啶酯 ( AE) 等经氧化剂氧化或催化剂催化后成为激发态产物，当 其回到基态时就会将剩余能量转变为光子， 随后利用发光信号测量仪 器测量光量子的产额。将发光物质直接标记于抗原 (称为化学发光免 疫分析 )或抗体上 (称为免疫化学发光分析 ) ，经氧化剂或催化剂的激 发后，即可快速稳定的发光， 其产生的光量子的强度与所测抗原的浓 度可成比例。亦可将氧化剂 (如碱性磷酸酶等 )或催化剂标记于抗原或 抗体上， 当抗原抗体反应结束后分离多余的标记物， 再与发光底物反 应，其产生的光量子的强度也与待测抗原的浓度成比例。 发光免疫分析的灵敏度高于包括 RIA 在内的传统检测方法，检测范 围宽，测试时间短， 仅需 30 - 60min 即可。试剂货架寿命长，稳定性 好，具有大规模自动化测试的功能。这项技术发展很快，已有许多厂 商生产各具特色的测定仪器与配套试剂。 目前我国仪器与试剂均需进 口，测定成本较高。其反应过程分为以下两个阶段。 (1)待测抗原 (Ag) 和一定量的碱性磷酸酶标记抗原 ( ALP-Ag) 同时与 一定量的特异性抗体 (Ab) 竞争结合。ALP-Ag-Ab 的量与 Ag 的量之 间存有竞争抑制的关系，即 Ag 的量越多，形成的 Ag-Ab 的量就越 多， ALP-Ag-Ab 的量越少。反之亦然。 (2) 加入 (羊)抗鼠 IgG 包被的磁性颗粒，捕获 ALP-Ag-Ab( 其中的 Ab 为鼠单克隆抗体 ) ，在磁场作用下将 ALP-Ag-Ab 与 ALP-Ag 分 开 ， 经 洗 涤 并 吸 弃 废 液 后 ， 加 入 化 学 发 光 底 物 ( dioxetane-phosphate ,AMPPD) ，后者为带有二氧四联环稳定结构的 化合物，在 ALP 的作用下去掉磷酸根，生成不稳定的中间体。中间 体迅速分解并同时释放出光子。光子的生成量与