化学发光原理及应用精.pdf

化学发光及生物发光的原理及其应用 第一部分 概述 化学发光 (ChemiLuminescence ，简称为 CL) 分析法是分子发光光谱分析法中 的一类，它主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定 条件下呈线性定量关系的原理， 利用仪器对体系化学发光强度的检测， 而确定待 测物含量的一种痕量分析方法。 化学发光与其它发光分析的本质区别是体系产生 发光 ( 光辐射 ) 所吸收的能量来源不同。 体系产生化学发光， 必须具有一个产 生可检信号的光辐射反应和一个可一次提供导致发光现象足够能量的单独反应 步骤的化学反应。化学发光体系用化学式表示为： 依据供能反应的特点， 可将化学发光分析法分为： 1 ）普通化学发光分析法 ( 供 能反应为一般化学反应 ) ； 2 ）生物化学发光分析法 ( 供能反应为生物化学 反应；简称 BCL) ； 3 ）电致化学发光分析法 ( 供能反应为电化学反应，简称 ECL) 等。 根据测定方法该法又可分为： 1 ）直接测定 CL 分析法； 2 ）偶合反应 CL 分析法 ( 通过反应的偶合，测定体系中某一组份； 3) 时间分辨 CL 分析法 ( 即利用多组份对同一化学发光反应影响的时间差实 现多组份测定 ) ； 4 ）固相、气相、掖相 CL 。分析法； 5 ）酵联免疫 CL 分析法等。 化学发光的系统一般可以表示为： 在整个的检测系统中其关键的部分为 PMT ，其直接影响到仪器的检测性能，其 最高检测极限为 10 － 22 mol/L 。不同型号的仪器其检测技术不一样，但基本 原理都是利用待测组份与体系的化学发光强度呈线性定量关系， 而化学发光强度 随体系反应进行的速度增强或衰弱。 记录仪记录峰形， 以峰高定量， 也可以峰面 积定量。因化学发光多为闪烁式发光 (1 —2s 左右 ) ，故进样与记录时差短， 分析速度快。 第二部分、化学发光常用的化学试剂及其原理 化学发光是某种物质分子吸收化学能而产生的光辐射。 任何一个化学发光反应都 包括两个关键步骤，即化学激发和发光。因此，一个化学反应要成为发光反应， 必须满足两个条件：第一：反应必须提供足够的能量 （ 170 ～ 300KJ ／ mol ）， 第二，这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发态， 并且有足够的 荧光量子产率。 到目前为止， 所研究的化学发光反应大多为氧化还原反应， 且多 为液相化学发光反应。 化学发光反应的发光效率是指发光剂在反应中的发光分于数与参加反应的分子 数之比。对于一般化学发光反应，值约为 10 － 6 ，较典型的发光剂，如鲁米 诺，发光效率可达 0 . 01 ，发光效率大于 0 。 01 的发光反应极少见。现将 几种发光效率较高的常用的发光剂及其发光机理归纳如下。 1. 鲁米诺及其衍生物 鲁米诺的衍生物主要有异鲁米诺、 4 — 氨基已基 —N 一乙基异鲁诺及 AHEI 和 ABEI 等。鲁米诺在碱性条件下可被一些氧化剂氧化，发生化学发光反应，辐射 出最大发射波长为 425nm 的化学发光。 在通常情况下鲁米诺与过氧化氢的化学发光反应相当缓慢， 但当有某些催化剂存 在时反应非常迅速。 最常用催化剂是金属离子，