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精品文档 精品文档 PAGE PAGE #欢迎下载 精品文档 精品文档 PAGE PAGE # 欢。迎下载 实验一微生物培养基的配制和灭菌 培养基是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质， 用人工方法配制而成的各种营养基 质。它具有微生物正常生活所需的各种养料和适宜的环境条件： （1）适当组分和比例的营养 物质；（2）适宜的pH值；（3）合适的渗透压；（4）保持无菌状态。所以培养基是培养微生物所 必需的最主要材料。培养基的配制是微生物工作者的主要技术操作之一。 、实验目的与耍求： ?了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。 ?了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。 ?熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。 二、实验原理与材料： （一一）培养基的种类 根据培养基的组成成分， 可将培养基分为三类： 合成培养基：由各种纯化学物质按一定 比例配制而成。 半合成培养基：由一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。 天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成的。 从培养基的物理状态来分： 液体培养基：不加凝固剂。 固体培养基：在液体培养基中加 2%左右的凝固剂。 半固体培养基：在液体培养基中加入 0.2 %一 0.5 %凝固剂。 微生物最常用的凝固剂为琼脂 （其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。它不是一种营养物质， 只能被极少数种类的细菌分解利用。 琼脂是从海藻中（主要是石花菜）提取而制成的。是一种 多糖类化合物，主要成分是复杂的多糖硫酸酯钙盐， 琼脂是一种可逆性胶体， 在常规浓度下 加热到96C以上即成溶胶状态，融化的琼脂，当温度下降到 42C以下，又凝固为固体。 表3-1 琼脂与明胶特性比较 比较项目 琼 脂 明 胶 比较项目 琼 脂 明胶 熔点（c ） 96 25 微生物可利用性 绝大多数微 部分微生物 凝固点（c） 40 20 生物不能水 能水解利用 酸碱度 微酸 酸性 解利用 灰分（%） 16.0 14.0 — 15.0 耐热性 强 弱 氧化钙（%） 1.15 0.0 来源 植物 动物 氯化镁（%） O.77 0.0 化学本质 多糖 蛋白质 氮（%） O.40 18.3 常用浓度（％ ） 1.5 — 2 5 一 12 （二）实验材料 ?药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂；马铃薯，蔗糖；可溶性淀粉、 K2HPQ KN0, MgSQ ? 7H20、FeSQ ? 7Hz0、等。 .高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌。 3.其它：天平、牛角匙、电炉、 1N HCl、1N NaOH pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏 斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸 管、各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等。 三、实验方法与步骤： （一） 、培养基的配置 ．培养基的配制常用方法和步骤： （1） 称量：按照培养基配方，正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 （2） 溶化： 在搪瓷杯中加入所需水量 （ 根据实验需要加入蒸馏水或自来水 ） ，用玻棒搅匀， 加热溶解。 （3） 调pH值（调pH也可以在加琼脂后再调），用1N NaOH或1N HCI调pH,用pH试纸对 照。 （4） 加琼脂熔化,在琼脂熔化过程中,需不断搅拌,并控制火力不要使培养基溢出或烧 焦,待完全熔化后,补足所失水分,一般数量少,时间短不必补水。 （5） 分装：在漏斗架上分装。根据不同的需要进行分装,一般制斜面的装量为管高的五 分之一。 特别注意不要使培养基粘污在管 （ 瓶） 口上以免浸湿棉塞,引起污染。 （6） 包扎成捆、挂上标签。培养基分装好后,塞上棉塞,用防水纸包扎成捆,挂上所配 培养基名称的标签。 （7） 灭菌备用。灭菌后如需制成斜面的,应在下磅后取出,摆成斜面, （见图 3 一 1）。 培养基经火菌后，必须放在 37C 恒温培养箱中培养 24小时，如确无菌生长，方可使用。 2．三种培养基的配方及配制 （1）. 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 （ 用于分离和培养细菌,是一种天然培养基 ） 。 配方： 牛肉膏 3 克 蛋白胨 5 克 氯化钠 3 克 琼脂 20 克 自来水 1000 毫升 pH 7 .2?7. 4 火菌 15 磅／英寸 2, 30 分钟。 本实验将原配方配成各种浓缩液。各种浓度如下： 30％牛肉膏、 50％蛋白胨, 30％氯化 钠。以配制 200 毫升培养基为例： 吸取 30％牛肉膏 2 毫升, 50％蛋白胨 2 毫升, 30％氯化钠 2 毫升,加入有刻度的搪瓷 烧杯中，然后用自来水补足到 200毫升。用玻捧搅匀，在电炉上稍加热，调 pH至7.4，加 琼脂 4克,加热熔化, 用玻棒不断搅拌, 至琼脂完全溶解为止, 趁热在漏斗架上装试管, （见 图 3—2） 。装带有棉塞