光激化学发光免疫检测技术与临床应用研究进展.pdf

光激化学发光免疫检测技术与临床应用研究进展 高云朝 近半个世纪以来， 临床化学微量免疫分析技术从放射免疫分析、 酶联免疫分析， 到化学 发光免疫分析， 经历了检测方法的革新与技术的进步， 医学检验质量和数量得到了迅速的提 高； 20世纪 90年代问世的 LOCI(Luminescent oxygen channeling immunoassay ， LOCI) 技术以 其独特的检测方法， 实现了均相、一步、 免清洗和高通量的检测， 并以其高灵敏度和特异性 等突出的检测性能为世人所瞩目。该技术最初由 Ullman 等 [1] 在 1994年报道， 由美国德灵公司 TM 研发成功， 后由 PerkinElmer 公司生产相关试剂 (AlphaScreen )，西门子公司生产免疫诊断试 剂（ LOCI ）。国产光激化学发光免疫检测系统由博阳生物科技（上海）有限公司建立在该技 术之上，并称之为 LiCA （Light Initiated Chemiluminesence Assay ，LiCA TM ）。仅此对该技术 基本原理和特点，以及目前国内外研究现状综述如下。 一、技术原理和特点 1．LOCI 检测原理：基于非竞争的免疫检测方法类似于 ELISA ，而基于的竞争的免疫检 测方法类似于放射免疫分析法。 以前者为例， 双抗体夹心结构 (抗体包被发光珠 -抗原 -生物素 化抗体 )与链霉亲和素包被的感光珠，通过链霉亲和素与生物素结合到一起，并拉近发光珠 和感光珠的间距。然后，感光珠在 680nm激发光的照射下，使周围氧分子激发变成单线态氧 1 ( △gO2 ，带有 1个激发态电子的氧分子 )，后者扩散至发光珠并传递能量， 发光珠发射 520-620 nm荧光信号并被光子计数器探测。此过程中，单线态氧的半衰期只有 4 μs，且最大扩散距离 大约 200nm 。而一般而言，当体系中不存在抗原抗体复合物时，发光珠和感光珠之间的距离 大于 200nm 。因此，此三级发光系统只有结合态发光珠才能传递单线态氧的能量并发光；非 结合态发光珠由于相距较远，无法获得能量而不发光 [1-6] ( 图1)。 作者单位： 200233 上海交通大学附属第六人民医院核医学科 注：光激化学发光检测时， a 图为感光珠和发光珠结合时则发光， b 图为感光珠 和发光珠不结合则不发光 图1 光激化学发光检测感光珠和发光珠的原理示意图 2．技术特点： 光激化学发光技术的特点是基于偶联在供体 -受体微球表面的发光物质经 光激发和能量传递而诱导发光， 能量传递依赖于受体 -配体结合所致的供体 - 受体微球相互靠 近而实现，而常见的受体 -配体系统如抗原 -抗体、生物素 -亲和素、蛋白酶 -底物。其采用纳 米级微粒作为固相载体， 增加了反应的比表面积， 极大地提高了检测灵敏度和缩短了反应时 间；恰当的荧光波长及时间分辨计数模式，有效提高了信噪比，增加了特异性 [1-2] ；均相反 应模式实现了一步、 免清洗检测。 检测过程不易受到荧光淬灭、 样本常见干扰物质、 pH值、 离子强度及温度等因素的影响，保证了检测的稳定性 [7-9] 。样本用量少 (一般 2.5 μl) ，易于实 现机器的小型化和样本的高通量检测