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弯曲菌检测操作程序 范围 本程序规定了粪便标本中弯曲菌（Campylobacter）的检验方法。 检验程序 弯曲菌检验程序见图6。 粪便或肛拭子 粪便或肛拭子 Preston肉汤 Preston肉汤 42 ℃ 42 ℃±1 ℃，24 h～48 h 改良CCD琼脂平板 改良CCD琼脂平板 42 42 ℃±1 ℃，1 d～5 d 挑取 挑取3个或以上可疑菌落，接种哥伦比亚血琼脂平板 42 42 ℃±1 ℃，24 h～48 h 氧化酶试验、 氧化酶试验、过氧化氢酶试验、革兰氏染色镜检 马尿酸钠水解试验、 马尿酸钠水解试验、吲哚乙酸酯水解试验 报告 报告 弯曲菌检验程序 操作步骤 标本收集 标本包括新鲜的或转移至Cary-Blair运送培养基的粪便或肛拭子。肛拭子不是最佳标本，仅在病人无粪便标本时采用。肛拭子收集后应当目测，需要在拭子上明显见到粪便。 所采集的标本尽快检验，放入Cary-Blair运送培养基中的标本应在冷藏条件下12 h内送检。新鲜的粪便标本置于清洁、干燥、无肥皂或消毒液残留的容器中，冷藏条件下12 h内送检。 空肠弯曲菌需要微需氧培养，运输用的运输培养基应尽量使管内装满，沾有粪便的棉签或者肛拭子尽量全部插入培养基内。如有条件，可将样品置于微需氧环境（如强塑厌氧盒加入微需氧产气袋）中运输。 弯曲菌在环境中比较脆弱，所以对标本的要求比较高，尽量使用新鲜粪便。 分离培养 粪便拭子在改良CCD琼脂平板一区划线；以1 μL无菌接种环或接种针划线分离。在标本中再插入一个清洁的无菌拭子，将拭子放入Preston增菌肉汤。放入42 ℃±1 ℃微需氧（85% N2，10% CO2，5% O2混合气体培养箱或者使用密闭容器如强塑厌氧盒，放入适量的微需氧产气袋）培养24 h～48 h。增菌液划线改良CCD琼脂平板，42 ℃±1 ℃微需氧培养1 d～5 d。 菌落特征 改良CCD琼脂平板上典型的弯曲菌为灰色、湿润、沿划线生长，直径为1 mm～2 mm。空肠弯曲菌通常为灰绿色的菌落，非常干燥，有或无金属光泽。典型的结肠弯曲菌为灰色、湿润、突起的菌落。 纯培养 挑取3个或以上可疑菌落，划线接种哥伦比亚血琼脂平板，微需氧环境下，42 ℃±1 ℃培养24 h～48 h。 初步鉴定 氧化酶试验：挑选纯培养的单个菌落进行氧化酶试验，弯曲菌为氧化酶阳性。 过氧化氢酶试验：挑取血平板上的生长菌落于洁净载玻片上，滴加一滴3%的过氧化氢溶液，30 s内产生气泡者为阳性。 革兰氏染色镜检：弯曲菌为革兰氏染色阴性菌。镜下为弧形、S形或螺旋状弯曲杆菌。 确定鉴定 马尿酸钠水解试验：挑取血平板上的生长菌落，置含0.4 mL 1%马尿酸钠盐的试管中。摇动混匀。36 ℃±1 ℃水浴2 h或36 ℃±1 ℃培养箱中放置4 h。沿着试管壁缓缓加入0.2 mL茚三酮溶液，不要摇动。36 ℃±1 ℃水浴或培养箱中放置10 min后判读结果：深紫色为阳性，淡紫色或无颜色变化为阴性。 吲哚乙酸酯水解试验：挑取血平板上的生长菌落至吲哚乙酸酯纸片上，再滴加一滴灭菌水。如果吲哚乙酸酯水解，则在5 min～10 min内出现深蓝色；若无颜色变化则没有发生水解。 弯曲菌的生化鉴定见表13。 弯曲菌属种的生化鉴别表 项目 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 红嘴鸥弯曲菌 氧化酶试验 ＋ ＋ ＋ 过氧化氢酶试验 ＋ ＋ ＋ 马尿酸钠水解试验 ＋ － － 吲哚乙酸酯水解试验 ＋ ＋ － 菌株的保存和上送 将菌株接种哥伦比亚血平板，42 ℃±1 ℃微需氧培养48 h，刮取菌苔，悬浮于含20%甘油的脑心肉汤，-80 ℃或者液氮长期保存，-20 ℃短期（3～6个月）保存。按照方案要求定期上送。 报告 根据3.5和3.6结果，报告是否检出弯曲菌。