猪瘟ELISA抗体检测试剂盒说明书.docxVIP

PAGE PAGE #欢迎。下载 1 1欢迎下载 精品文档 猪瘟ELISA抗体检测试剂盒 猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒 使用说明书 【简介】 试剂盒由抗原包被的微孔板，酶标羊抗猪 IgG及其它试剂制成，应用间接 ELISA原理检测猪血清中抗猪瘟 病毒抗体。 【用途】 猪瘟ELISA诊断试剂盒用于检测猪血清中猪瘟病毒抗体。评估猪场猪瘟疫苗免疫状况，感染猪的血清学诊 断。 【原理】 本试剂盒是采用猪瘟抗原包被微孔板，在试验中，加入稀释的对照血清和待检血清，经温育后，若样品中 含有抗猪瘟病毒的特异性抗体，则将与检测板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加 入酶标二抗，与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加 TM B底物液，与酶反应形成蓝色产物，加入 HF溶液终止反应后，用酶标仪 630n m波长测定各反应孔中的 0D 值。 【试剂盒主要成分】 1 包被抗原的微孔板 2 块 （96孔/块） 2 阴、阳性对照血清 各1 管 （0.5ml/ 管） 3 羊抗猪酶标二抗 1 瓶 （20ml/ 瓶） 精品文档 4 20 倍浓缩洗涤液 1 瓶 （ 30ml/ 瓶） 5 底物A液、B液 各1 瓶 （ 10ml/ 瓶） 6 终止液 1 瓶 （ 10ml/ 瓶） 7 样品稀释液 1 瓶 （ 50ml/ 瓶） 8 血清稀释板 2 块 （96 孔/块） 9 说明书 1 张 【样品制备】 取动物全血，按常规方法制备血清， 要求血清清亮，无溶血。 【洗涤液配制】 使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（ 25'C左右），并摇动使沉淀的盐溶解（最好在 37'C水中加热5-10m in ），然后用蒸馏水或去离子水作 20倍稀释（例如：每板用 20 ml浓缩液加上380ml水），稀释好的洗涤 液在4C可以存放7天。 【样品稀释】 在血清稀释板中按1 : 40的体积稀释待检血清（195卩l样品稀释液中加5卩l待检血清）。 注意：阳性对照和阴性对照 1 : 40稀释，（234卩l样品稀释液中加6卩l对照血清）。 【注意事项】 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用后放回 2-8 C。 不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。 不要用口移液。 TMB （底物液B）不要暴露于强光，避免接触氧化剂。 检测板拆封后避免受潮或沾水 （未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，应尽快置于 4C）。 待检血清样品数量较多时，应先使用血清稀释板稀释完所有要检测血清，再将稀释好的血清转移到检 测板，使反应时间一致。 浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释，如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。 严格按照操作说明书可以获得最好的结果，操作过程中移液，定时和洗涤等的全过程必须精确。 【操作步骤】 取预包被的检测板（根据样品多少，可拆开分次使用），将稀释好的待检血清取 100 g l加入到检测板 孔中。阴性对照和阳性对照各设 2孔，每孔100 g l。轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置 37C温育30分钟。 甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗板 5 次， 200g l/ 孔，每次静置 3分钟倒掉，再在干净吸水纸上拍干。 每孔加羊抗猪酶标二抗 100 g l，置37C温育30分钟。 洗涤 5 次, 方法同 2。切记每次在干净吸水纸上拍干。 每孔先加底物液 A 一滴（50 pl）、再加底物液 B 一滴（50g ），混匀，室温（18 C -25 C ）避光显色10 分钟。 每孔加终止液1滴（50 g l），10分钟内测定结果（测定前在震荡器上轻轻震动一下）。 【结果判定】 在酶标仪上测各孔OD630值。试验成立的条件是阳性对照孔平均 OD630值大于或等于1.0， 阴性对照孔平均OD630值必须小于0.3。 样品OD630值大于0.35，判为阳性；样品 OD630值小于0.35，判为阴性。 注意：用 620 ~650 纳米波长测定结果均有效。 【贮 存】2-8 C避光保存 精品文档 有 效 期】 6 个月