07 第六章 放线菌遗传4.ppt

①起始阶段。 ? 病毒编码的 p6 蛋白和 p17 蛋白与复制起点结合形成 蛋白一核酸复合物，使双 链 DNA 的末端解螺旋，产 生单链区。一分子游离的 TP 与特异的 DNA 聚合酶结 合形成 TP-DNA 聚合酶复 合物，然后 TP-DNA 聚合 酶复合物识别复制起点并 与之结合。接着 DNA 聚合 酶催化 TP 蛋白的丝氨酸残 基上的 OH 基团与 dAMP 共 价结合。 ②延伸阶段。 ? DNA 复制起始后，在相同的 DNA 聚合酶的作用下，通过“链弃置 机理 ”（ strand-displacement mechanism) 进行 DNA 链的延伸，即 合成新链的同时使带有 TP 的亲本 链游离出来，单链结合蛋白 p5 结 合在被弃置的母链上，同时起始 蛋白从 DNA 链上脱离下来。 ? 复制是连续进行的，没有冈崎片 段的出现。在 DNA 一端起始合成 后，另一端也以同样的方式开始 复制，形成所谓的 typeII 复制中间 体，即全长的双链 DNA, 并带有 1 个或 2 个单链分枝。 ? 当复制继续进行，两个复制叉相 遇时， Type I 复制中间体在空间上 相互分开，形成 2 个 Type II 复制中 间体。每个 TypeI 复制中间体，都 具有全长 DNA, 并且起始合成的一 端是双链 DNA, 尚未完成复制的另 一端是单链 DNA. ③终止阶段。 ? 随着单链结合蛋白 p5 从单链 DNA 上的移去， 复制继续进行到 DNA 的另一端，完成复制。 一旦合成全长双链 DNA 分子， DNA 聚合 酶就会与另一个 TP 结 合，开始新一轮 DNA 复制。 （ 2 ） 线性质粒和线性染色体的接合转移的比较 ? 在放线菌中，线性质粒和线性染色体的接合转移方式可能与 F 质粒的方式类似。结合着末端蛋白 TP 的 DNA 的 5 端作为转 移起点（ oriT ）。在转移起点处， TP 作为引物起始 DNA 的 复制，被弃置的带有 TP 的亲本链开始向受体细胞转移，其 过程类似于 F/Hfr 转移。 二、链霉菌中的转座因子 ? 链霉菌中的转座因子 包括插入序列、转座 子和可转座的噬菌体。 ? 目前发现的转座因子 都不含天然选择标记， 有的位于染色体上， 有的位于质粒上。 三、链霉菌中的噬菌体 ? 链霉菌中既有温和性噬菌体也有烈性噬菌体，有些噬菌体 的寄主范围窄，而有些噬菌体的寄主范围广泛。由于链霉 菌属于土壤细菌，因此链霉菌的噬菌体最容易从土壤中分 离而得到。 ? 已经从很多链霉菌中分离到噬菌体，如天蓝色链霉菌中的 ΦC31 噬菌体、委内瑞拉链霉菌（ S. venezuelae ）中的 ΦSVl 噬菌体、龟裂链霉菌中的 RP2 和 RP3 噬菌体。 ? ΦC31 是链霉菌的广寄主范围的温和噬菌体，在形态和其 他特征上与大肠杆菌 a 噬菌体类似。 ΦC31 既能溶源又能裂 解，噬菌体通过 att 位点整合到宿主染色体的特异位点上而 形成原噬菌体。其 DNA 长度为 41.4kb ， G+C 含量为 63 ％， 具有粘性末端。 第三节 链霉菌的接合作用 ? 链霉菌间的遗传重组主要通过质粒介导的接合作用进行 。 一、链霉菌基因重组的证实 1955 年塞蒙梯 (Sermonti ) 夫妇首先发现天蓝色链 霉菌可通过遗传重组交换产生重组体。 ? 将两个不同的营养缺陷型菌株混合培养，使基质菌丝 相融合。 ? 一个菌丝的部分染色体通过菌丝间的连接而进人另一 菌丝形成局部杂合核。 ? 局部杂合核在分裂过程中发生染色体交换和减数，在 同一菌丝体上形成各种单倍重组体孢子。 – 由一个杂合核演化繁殖形成的菌落叫异质系克隆 (heteroclone) 。 由异质系克隆产生的抱子大多不能在基本培养基上生长，采 用不同的选择性培养基可以鉴别出不同类型的单倍重组体。 异质系是放线菌基因重组所特有的现象。 二、天蓝色链霉菌中的性别体制和遗传重组 与链霉菌育性有关的质粒： SCP1 、 SCP2 和 SCP2 * 1 、天蓝色链霉菌 A3(2) 的性别体制 ? SCP1 是在链霉菌中发现的第一个与遗传重组有关 的性因子。控制着天蓝色链霉菌的各种致育状态。 UF ( 超致育型， Ultrafertility ） ：不含 SCP1 质粒的菌株 IF( 原始致育型， Initial Fertility ）：携带 SCP1 质粒的菌株 NF( 正常致育型， Normal Fertility ）： SCP1 整合在寄 主染色体上的菌株 育性杂交（与 F 质粒比较） ? 天蓝色链霉菌的三种致育类型与大肠杆菌的三种 致育类型类似，但是二者之间也有区别。 – UF × UF →可以得到少数重组子（可育，也可能是其他 育性质粒引起） ? （ F － × F － →不育