大鼠p物质(sp)elisa试剂盒说明书.doc.docxVIP

大鼠P物质（SP）酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书 产品编号：QS41985 北京奇松生物科技有限公司 本试剂盒仅供体外研究使用！ 预期应用 ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关生物液体中 SP含量。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗 SP抗体的微孔中依次加入标本或 标准品、生物素化的抗 SP抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物 TMB显色。 TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和 样品中的SP呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（ OD值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 酶联板：一块（96孔） 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至 1ml，盖好后静置10分钟以 上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为 500 pg/ml ,做系列倍比稀释（注：不要直接 在板中进行倍比稀释）后，分别稀释成 500 pg/ml ，250 pg/ml ，125 pg/ml ，62.5 pg/ml ， 31.2 pg/ml ， 15.6 pg/ml ， 7.8 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度 0 pg/ml，临用前15 分钟内配制。如配制 250 pg/ml标准品：取 0.5ml （不要少于 0.5ml） 500 pg/ml的上述标 准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendof管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 样品稀释液：1 X20ml。 检测稀释液 A: 1X10ml。 检测稀释液 B: 1X10ml。 检测溶液A: 1X 120^1（1:100 ）临用前以 检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计 算好的每次实验所需的总量配制（100卩1/孔），实际配制时应多配制 0.1-0.2mI。女口 10卩1 检测溶液A加990^1检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 检测溶液B : 1X 120卩瓶（1:100 ）临用前以 检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测 溶液A。 底物溶液：1X10ml/瓶。 浓洗涤液：1X30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释 25倍。 终止液：1X10ml/ 瓶（2N H2SO4 ）。 覆膜：5张 使用说明书：1份 自备物品 酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热） 微量加液器及吸头，EP管 蒸馏水或去离子水，全新滤纸 标本的米集及保存 血清：全血标本请于室温放置 2小时或4 C过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即 可检测，或将标本放于-20 C或-80 C保存，但应避免反复冻融。 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后 30分钟内于2 - 8 °C 1000 x g 离心 15分钟，或将标本放于-20 C或-80 C保存，但应避免反复冻融。 其它生物标本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测， 或将标本放于-20 C或-80 C 保存，但应避免反复冻融。 注：以上标本置 4 C保存应小于1周，-20 C或-80 C均应密封保存，-20 C不应超过1个月， -80 C不应超过2个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 操作步骤 实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在 37 C溶解）；试 剂或样品稀释 时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样 品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100卩1余孔分别加 标准品或待测样品100^1,注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部， 尽量不触及 孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜， 37 C反应120分钟。为保证实验结果有效 性，每次实验请使用新的标准品溶液。 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加 检测溶液A工作液100^1（在使用前一小时内配 制），酶标板加上覆膜，37 C反应60分钟。 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约400卩海 孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干） 。 每孔加检测溶液B工作液（同检测 A工作液）100卩1酶标板加上覆膜 37 C反应60分 钟。 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板 5次，每次浸泡1-2分钟，350卩I每孔，甩 干（也可轻拍将孔内液体拍干）。 依序每孔加 底物溶液90卩1酶标板加上覆膜 37 C避光显色（30分钟内，此时肉眼可见 标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后 3-4孔梯度不明显，即可终止）。 依序每孔加终止溶液50 1终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与 底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间