热带假丝酵母的实验论文.doc

热带假丝酵母产SCP发酵培养基的优化实验及相关数据处理 / / / BI * ? Al A2 A3 全血试验法取点 班级：XXXX 学号：XXXXX 组号：XX姓名：XXX ?实验安排：每个班级按先后分成两批次（第一批：本周六?下周二；第二批： 下周二?周五）；每批次按4?5人/组，请学习委员按学号编号组。 ?实验要求：（1）每位同学务必参与到实验各个环节，包括培养基配制、 灭菌、接种、结果测定；（2）每位同学根据实验结果，单独进行统计学分析，并 形成实验报告；（3）在实验实施的过程屮务必保持好秩序，及时清理实验过程屮 的卫生。 前言 单细胞蛋白（Sin莒le Cell Protein, SCP）又称微生物蛋白或菌体蛋白，常常 可以通过细菌、酵母菌等微生物发酵培养而得山铁酵母菌是最早且是最广泛用 于生产SCP的菌种，主要包括假丝酵母属、丝泡酵母属、汉森酵母属和接合豆泡 酵母属等⑶。SCP所含的营养物质极为丰富，具有丰富的粗蛋白质、氨基酸、维 生索和促生长因子，除供人类直接食用或作医药外，更是一类理想的蛋白质饲料 [4.5] O 微牛物发酵的牛产水平取决于牛产菌种的特性和发酵条件，其屮培养基组成 会对发酵过程产生重要的影响⑹。尤其是在工业化发酵生产屮，为了降低成木， 发酵所用的碳源、氮源等原材料大多来源于农副产品。但是，这些原材料的组分 非常复杂，除了含有供菌体生长代谢和产物合成的有益营养成分外，可能还含有 对发酵不利的成分。因此在工业化发酵屮，首先必须对发酵培养基的组成和浓度 进行考察，找出影响发酵水平的关键因索，以便最大限度地发挥菌种的生产能力。 H前已广泛应用正交实验设计、响应面设计⑺以及均匀设计凶等优化方法对发酵 培养基配方进行考察优化，效果非常显著。DPS数据处理系统（D“Ui Processing System）也是一种强有力的培养基优化软件，它不仅包含实验设计方法，而且还 可以对实验结果进行有效的统计分析⑼，H前已成功地应用于许多发酵培养基的 考察和优化中[叫 本实验拟采用DPS软件（DPS v7.05版）的正交实验设计方法对热带假丝酵 母产SCP的发酵培养基进行了优化，以期使同学们能熟练地理解并应用多因素多 水平的实验设计方法和统计方法，为今后从事本科毕业论文的实验打下一定的基 础。 材料和方法 2.1主要试剂 蔗糖，蛋白腺，其它无机盐试剂均为国产分析纯。 2. 2主要仪器 摇床、低速大容量离心机、烘箱、培养箱等。 2.3菌种 热带假丝酵母(Candida Wopicalis):由本实验室保存。 2.4培养基 2.4.1斜面培养基(g/L) 葡萄糖 20,蛋白豚 10、MgSO4 0.5> KH2PO4 1> NaCl 0.1、琼脂 20； pH 自然。 2.4.2发酵培养基组分 蔗糖、蛋白腺、MgSO4> KH2PO4； pH自然。 2.5摇瓶培养方法 2.5.1斜而培养 从?20 °C的冰箱小取出保藏好的甘油管菌种，接种于配制好的斜面，置于28 °C恒温培养箱培养60 ho 2.5.2摇瓶分批发酵 以无菌水洗下斜面丄的菌体，制成菌悬液。取菌悬液lmL接至装量为30 mL/250mL三角瓶的发酵培养基屮，30 °C振荡(180r/min)培养36h。测定结果为 二个平行样的平均值。 2.6单细胞蛋白(SCP)的测定方法 吸取30 mL发酵液，4000 r/min下离心10 min,离心所得菌体以蒸馅水清洗一 次后在65 °C下烘干至恒重。采用凯氏定氮法测定干菌体屮粗蛋白含量。根据公 式：单细胞蛋口(g/L)二菌体干重(g/L) x粗蛋口含量，计算出发酵液屮的单细 胞蛋白产量。 附：经李昆太老师所做的预实验，热带假丝酵母屮lg干菌体含0.4498 g ? A质。 3.结果与分析 3.1试验设计及结果 正交实验设计是安排多因子的一种常用方法，通过合理的实验设计，可用少 量的具有代表性的试验来代替全而试验，较快地确定各成分在培养基屮的适宜浓 度。在热带假丝酵母发酵培养基优化的过程屮，以蔗糖、蛋白腺、kh2po4以及 MgSO4为试验因素进行发酵培养基的优化。试验以放瓶时(36 h)的SCP产量 为考察指标，采用L9 (3°)正交表设计，共9个处理，每个处理做2次重复。 具体的试验设计情况和实验结果分别见表1和表2。 表1正交试验的因素和水平 Tablel Factors and levels of orthogonal design Factors Levels A B CD 蔗糖(gd)蛋口腺 蔗糖(gd) 蛋口腺(g/L) KH0PO4 (g/L) MgSO4 (g/L) TOC \o "1-5" \h \z 30 10 0 0 60 20 4 2 80 30 8 4 表2正交设计与实验结果 Tabl