试验6厌氧菌棒状杆菌分枝杆菌等.ppt

实验六 厌氧性细菌、棒状杆菌、分枝杆菌等 Content ? 示教 ? 破伤风梭菌及产气荚膜梭菌的形态、染色性及培养特性 ? Nagler 反应、汹涌发酵 ? 结核分枝杆菌：抗酸染色法，液体、固体培养 ? 麻风分枝杆菌：抗酸染色 ? 白喉棒状杆菌： Albert 染色法、吕氏血清斜面、 亚碲酸盐 平板 ? 操作 ? 产气荚膜梭菌致病性实验 ? 病人痰液（结核分枝杆菌）抗酸染色法 ? 口腔螺旋体的检查 ? 肠道致病菌粪便标本的分离与鉴定（续） —— 血清学反应 厌氧性细菌的分类 厌氧菌 厌氧芽孢梭菌 无芽孢厌氧菌 破伤风梭菌 产气荚膜梭菌 肉毒梭菌 艰难梭菌 G + G - 双歧杆菌 消化链球菌 脆弱类杆菌 韦荣菌属 ? 破伤风梭菌 革兰阳性，菌体细长，有周身鞭毛、 无荚膜。芽胞正圆，位于菌体顶端，使细菌 呈鼓槌状。 血平板上，有 β 溶血。 ? 产气荚膜梭菌 革兰阳性粗大杆菌，芽胞位于次极端， 呈椭圆形，有明显的荚膜，无鞭毛。 血琼脂平板：双层溶血环 内环完全溶血 - θ 毒素 外环不完全溶血 - α 毒素 蛋黄琼脂平板： Nagler 反应 牛奶培养基：“汹涌发酵” Nagler 反应 产气荚膜梭菌产生 卵磷脂酶分解卵黄 中卵磷脂所致 汹涌发酵 在牛奶中分解乳糖， 使其中酪蛋白凝固 细菌产生大量 H 2 和 CO 2 将产气杆菌 接种于紫牛 奶培养基中 “V” or “L” letter-like in Gram stain 亚碲酸钾血平板 白喉棒状杆菌生物学特性 Albert 染色 ( 异染颗粒 ) ? 革兰阳性，菌体一端有不规则的膨大呈棒状 ? Albert 染色 —— 异染颗粒：用作鉴定 ? 吕氏血清培养基 ( 含有凝固血清 ) 上生长迅速，异染 颗粒明显 ? 亚碲酸钾血平板，亚碲酸盐可抑制杂菌生长 , 白喉棒 状杆菌生长形成黑色菌落 Elek 平板试验结果 Elek Test 沉淀线 ( 阳性 ) 含白喉抗毒素滤纸片 白喉杆菌菌苔 结核杆菌 ? 形态与染色 ? 细长略带弯曲 ? 细胞壁脂质含量高，肽聚糖外大量分 枝菌酸 ? 齐－尼抗酸染色阳性 ? 培养特点 ? 专性需氧 ? 液体培养基 ： 表面生长 ( 菌膜 ) ? 固体培养基： 粗糙型菌落 ( 菜花状 ) ? 生长缓慢 , 营养要求高 , 常用罗氏培养基 蛋黄 , 马铃薯 , 甘油， 孔雀绿 麻风分枝杆菌 ? 形态、染色与结核分枝杆菌相似 ? 麻风分枝杆菌是一种典型胞内菌 ( 麻风细胞 ) ? 体外人工培养至今仍未成功 Albert 染色法 ? 制片同革兰染色 ? 甲液染 5 分钟 → 水洗 → 再以乙液（碘液）染 1 分钟 → 水洗 → 印干 → 油镜检 抗酸染色法 (acid-fast stain) ： 以 5 ％石炭酸复红 加温染色，再用 3 ％盐酸酒精脱色，然后用美蓝复染，则分枝 杆菌呈红色 (+) ，其他细菌和背景物质为蓝色 (-) 。 实验过程：取痰液 → 涂片（略厚） → 干燥 → 固定 → 石炭酸 复红染色 8 ～ 10 分钟 → 水洗 → 用 3% 的盐酸酒精脱色约 1 — 2 分钟 → 水洗后，用碱性美蓝复染 1 分钟 → 水洗，印干 → 镜检 抗酸染色法 口腔螺旋体的检查 ? 牙垢涂片：观察奋森螺旋体和梭杆菌。两 者为共生菌，条件致病，可引起牙龈炎、 口腔炎等。