试验一显微镜的基本知识与使用.ppt

实验一 显微镜的基本知识及使用方法 一、目的要求 ? 学习显微镜的原理、使用方法和保养。 ? 利用显微镜观察微生物标本 ? 学习显微数码系统的使用方法。 ? 学习生物绘图。 二、实验程序 了解显微镜的构造、原理 利用显微镜观察微生物标本 了解显微数码系统的使用方法 生物绘图与拍照 三、实验材料 ? 微生物染色装片标本。 ? 显微镜、计算机、香柏油、二甲苯或乙醇 乙醚混合液、擦镜纸等。 四、实验步骤 （一）了解显微镜的构造、原理 ? 链接实验录相 1 、 光学部分： 接目镜、接物镜、照明装置 ( 聚光 镜、虹彩光圈、反光镜等 ) 。 它使检视物放大，造成物象。 2 、 机械部分： 镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、 载物台、载物台转移器、粗调节 器、细调节器等部件。 它起着支持、调节、固定等作 用。 显微镜的构造 图 1-2 光学显微镜的成像原理 倒立的虚像 工作原理 1 、 放大倍数 = 接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 2 、显微镜的分辨率 是表示显微镜辨析物体（两 端）两点之间距离的能力，可用公式表示为： D= λ/ 2 n· sin(α/ 2 ) 式中 D ：物镜分辨出物体两点间的最短距离。 ? ：可见光的波长（平均 0.55 ? m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 ? ：镜口角（即入射角）。 3 、数值孔径 N.A=n.sin （ α/2 ） ? ①干燥系物镜 以空气为介质，如常用的 40 ×以下 的物镜，数值孔径均小于 1 。 ? ②油浸系物镜 常以香柏油为介质，此物镜又叫油 镜头，其放大率为 90 × — 100 ×，数值孔值大于 1 。 ? 根据物镜放大率的高低，可分为： ? ①低倍物镜 指 1 × — 6 ×， NA 值为 0.04 — 0.15 ； ? ②中倍物镜 指 6 × — 25 ×， NA 值为 0.15 — 0.40 ； ? ③高倍物镜 指 25 × — 63 ×， NA 值为 0.35 — 0.95 ； ? ④油浸物镜 指 90 × — 100 ×， NA 值为 1.25 — 1.40 。 油镜使用的原理 ? 增加照明亮度：油镜，即油浸接物 镜。当光线由反光镜通过玻片与镜 头之间的空气时，由于空气与玻片 的密度不同，使光线受到曲折，发 生散射，降低了视野的照明度。若 中间的介质是一层油（其折射率与 玻片的相近），则几乎不发生折射， 增加了视野的进光量，从而使物象 更加清晰。 ? 提高分辨率：香柏油（ n=1.515 ）为 介质时，其折射率与玻璃相近，光 线经过载玻片后可直接通过香柏油 进入物镜而不发生折射，从而增加 数值孔径达到提高分辨率的目的。 （二）了解显微数码系统的使用方法 ? 链接演示显微数 码系统软件的使 用方法 ? 演示拍照的方法 ? 图片保存要求 ? 建文件夹： D:\ 环境 0511 班 200522200**** ? 图片： 格式： JPG 文件名：环境 200522200**** 大肠杆菌 （ 10 × 100 ） （三） 利用显微镜观察微生物标本 ? 1 、观察前的准备 ? 2 、低倍镜观察 ? 3 、高倍镜观察 ? 4 、油镜观察 ? 5 、镜检完毕后的处理 1 、观察前的准备 （ 1 ）将显微镜置于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿 约为 3 － 4cm 。检查零件是否齐全，镜头是否清洁。 （ 2 ）调节光亮度 （ 3 ）调节目镜及数值孔径大小 链接实验录相 2 、低倍镜观察 将标本片放置在载物台上，用标本夹夹住，移动推动器， 使被观察的标本处在物镜正下方。 转动粗调节旋钮，使物镜调至接近标本处，用目镜观 察并同时用粗调节旋钮慢慢下降载物台，直至物像出 现，再用细调节旋钮使物像清晰为止。 用推动器移动标本片，找到合适的目的像并将它移到 视野中央进行观察。 链接实验录相 3 、高倍镜观察 ? 在低倍物镜观察的基础上转换高倍物镜。较好 的显微镜，低倍、高倍镜头是同焦的，在正常 情况下，高倍物镜的转换不应碰到载玻片或其 上的盖玻片。 ? 若使用不同型号的物镜，在转换物镜时要从侧 面观察，避免镜头与玻片相撞。然后从目镜观 察，调节光照，使亮度适中，缓慢调节粗调节 旋钮，使载物台下降，直至物像出现，再用细 调节旋钮调至物像清晰为止，找到需观察的部 位，并移至视野中央进行观察。 链接实验录相 （ 1 ）升高镜筒，将油镜转至工作位置。在玻片标 本区域滴加香柏油。 （ 2 ）从侧面注视，用粗调节器慢慢降下镜筒，使 油镜浸在油中几乎与装片接触，但不可压及装片， 以免压碎玻片，损坏镜头。