试验三线粒体和液泡系的.ppt

实验三 线粒体和液泡系的 超活染色与观察 一 实验目的 1 观察动、植物活细胞内线粒体、液泡的 形态、数量和分布 2 了解细胞和细胞器的超活染色技术。 二 实验原理 ? 活体染色是指对生活有机体的细胞或组 织能着色但又无毒的一种染色方法。 ? 活体染色可用来研究生活状态下的细胞 形态结构和生理、病理状态。 ? 根据染色剂性质和染色方法不同，分为 体内活染和体外活染。 ? 活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部 分，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。碱性 燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有 阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子， 这样，他们彼此就发生了吸引作用。但不是任何染料 都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒 性或毒性极小的染料，而且总要配成稀淡的溶液来使 用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶 解在类脂质的特性，易于被细胞吸收， Janus green B 和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料， 对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。 ? 詹纳斯绿Ｂ可专一性地对对线粒体进行 活染 , 这是由于线粒体内的细胞色素氧化 酶系的作用，使染料始终保持氧化状态 ( 即有色状态 ), 呈蓝绿色。 ? 中性红对液泡系的染色具有专一性，将 活细胞中的液泡系染成红色。 三 实验用品 ? 1 ．器材： 显微镜、恒温水浴锅、、剪刀、镊子、解剖刀、 载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸 ? 2 ．试剂： Ringer 液、 1/5000 詹纳斯绿Ｂ、 1/3000 中性红 ? 3 ．材料： ? 人口腔上皮细胞 ? 洋葱鳞茎内表皮细胞 ? 小麦或黄豆幼根根尖 四 实验方法 ? 一 线粒体的超活染色与观察 詹纳斯绿 B 能专一对线粒体进行超 活染色，呈蓝绿色。 1 人口腔粘膜上皮细胞线粒体 的超活染色观察 ? 载玻片 → 37 ℃ 水浴锅的金属板 → 滴两滴 詹纳斯绿 B 染液 ? 牙签 → 从口腔粘膜刮取上皮细胞 → 放入 载玻片染液 → 染色 10-15 分钟 → 盖上盖玻 片 → 观察 ? 低倍镜 → 平展的口腔上皮细胞 → 高倍镜 → 颗粒或短棒状线粒体 2 洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的 超活染色 ? 载玻片 → 滴一滴詹纳斯绿 B 染液 → 撕取一 小片洋葱鳞茎内表皮 → 染色 10-15 分钟 ? 吸去染液 → 加一滴 Ringer 液 → 盖上盖玻 片 → 观察 二 液泡系的超活染色与观察 ? 中性红对液泡系的染色具有专一性，将 活细胞中的液泡系染成红色。