试验二凝集反应.ppt

主讲教师：张秋玉 实验二 凝集反应 基础医学院免疫学院 凝集反应（ agglutination) 沉淀反应 (precipitation) 补体结合实验 中和实验 免 疫 酶 标 技 术 (eg. ELISA) 免疫荧光技术 放射免疫技术 发光免疫技术 经 典 反 应 现 代 反 应 抗 原 抗 体 反 应 类 型 抗原或抗体的检测方法 反应类型 抗原类型及例子 凝集反应 颗粒性 Ag ， 如细菌、 RBC 、表面结合可 溶性 Ag 的乳胶颗粒等 沉淀反应 可溶性 Ag ， 如血清中免疫球蛋白、补体、 αFP 、 HbsAg 等 补体结合 实验 有补体参与， SRBC 和其溶血素组成指示 系统 中和实验 特殊作用的 Ag ，如病毒、毒素、激素、酶 ? 1.1 经典的血清学反应 1.2 现代的抗原抗体反应： ? 现代抗原抗体反应用标记技术代替传统的肉眼可 见反应，其特异性、敏感性均增加，且可以定性、 定量甚至定位；缺点是需特殊精密检测仪 。 名称 标记物 检测仪器 缺点 免疫酶标技术 酶 酶标仪 免疫荧光技术 荧光 荧光显微镜或流 式细胞仪 放射免疫技术 同位素 液闪仪 放 射 性 污 染 ， 有半衰期 发光免疫技术 发光剂 发光现微测定仪 凝集反应的定义及基本类型 1 ．直接凝集试验 颗粒性 Ag 与相应 Ab 的反应 玻片法：如血型的鉴定、细菌菌种的鉴定 试管法：肥达氏反应 2 ．间接凝集试验 （可溶性 Ag+ 载体 = 致敏颗粒）与相应 Ab 的反应 3 ．间接凝集抑制试验 可溶性 Ag 与相应 Ab 作用后，再与致敏颗粒反应 4. 反相间接凝集试验 （可溶性 Ab+ 载体 = 致敏颗粒 ) 与相应 Ag 的反应 试管凝集反应示意图 肥达氏反应 ---- 用已知伤寒菌的 H( 鞭毛 ) 和 O( 菌体 ) 以及 甲型 (A) 与乙型 (B) 副伤寒沙门氏菌的标准液与病人血清做 凝集试验，用于伤寒副伤寒的辅助诊断或用于流行病学调 查的免疫凝集实验。 人的红细胞表面有 20 几种血型抗原系统 ABO 血型系统是第一个被描述的红细胞血型系统，由 Landsteiner 于 1901 年提出： 血型 A B AB O 红细胞上的凝集原（抗原） A B A 和 B 无抗原 血型鉴定的原理 根据红细胞上所含抗原种类将人类血型分为如下血型： ABO 血型系统中有两种抗原，分别称为 A 抗原和 B 抗原， 均存在于红细胞膜的外表面。 1. 抗原本质：血型抗原是镶嵌于红细胞膜上的糖蛋白与糖脂， ABO 抗原特异性是在 H 抗原基础上形成的 2. 抗体本质： ? 血浆中存在两种相应的抗体即抗 A 抗体和抗 B 抗体 血型 A B AB O 红细胞上的凝集原（抗原） A B A 和 B 无抗原 血清中的凝集素（抗体） 抗 B 抗 A 无抗体 抗 A 和抗 B ☆ ABO 血型系统的 抗体为 天然抗体 ， 主要为 IgM ，不能通 过胎盘。 1. 如果交叉配血试验的两侧都没有凝集反应，为配血 相合， 可以进行输血； 2. 如果主侧有凝集反应，则为配血不合，不能输血； 3. 如果主侧不引起凝集反应，而次侧有凝集反应，只 能在应急情况下输血，输血时不宜太快太多 （ 300ml ），并密切观察，如发生输血反应，应立 即停止输注。 载玻片 1 块 / 每人 ** 用完各自用水冲洗净置消毒缸 三棱针 1 根 / 每人 用后弃垃圾斗 棉签 根 / 每人（先取再取 1) 用后弃垃圾斗 牙签 1 根 / 每人（两端使用） 用后弃垃圾斗 碘伏 生理盐水试管 试管架 标记笔 实验材料 操作步骤 ? i ． 取血：搓揉左手无名指的指腹 —— 碘伏消 毒 —— 用三棱针刺 1-2 滴血 —— 将无名指的指 腹封住盛有盐水的试管管口，用倾倒法将血滴 洗入盐水中并混匀形成 1% 的血球悬液。 ? ii ． 鉴定：取洁净玻片一块，用标记笔在中央 划线分区，标明“ A” 、“ B” 区 —— 在“ A” 、 “ B” 区分别滴加抗 A 、抗 B 血清各 1 滴 —— 用毛 细吸管吸取待检的血球悬液滴入抗 A 、抗 B 血清 中，用牙签两端分别拌匀 —— 将玻片平持手中， 前后左右转动使之充分混匀，室温放置 10-15 分钟后观察结果。 注意事项 ? 取血时，注意无菌操作，避免 HBsAg 的 交叉污染（ *HBsAg 携带者）； ? 刺血时，尽可能一次性成功，用力适当， 让血自然流出或搓揉后流出为佳，勿强 行挤压。 ? 鉴定时，滴 1 滴抗血清及血球悬液即可， 多则两边易混；牙签两头不可混用； ? O 型血无凝集现象，无须反复检测。