试验九用正交法测定几种因素对蔗糖.ppt

实验九 正交法测定几种因素对 蔗糖酶活力的影响 目的要求 1. 初步掌握正交实验设计方法的使用 2. 求出蔗糖酶的最适温度和最适 pH 值 实验原理 酶的催化作用是在一定条件下进行的，它受 多种因素的影响，如：底物浓度、酶浓度、溶液 的 pH 值和离子浓度、温度、抑制剂和激活剂等都 能影响催化反应的速度。通常是在其他因素恒定 的条件下，通过对某因素在一系列变化条件下的 酶活性测定，求得该因素对酶活力的影响，这是 单因素的简单比较法。 本实验用正交法测定温度、 pH 值、底物浓度 和酶浓度四种因素对蔗糖酶活性的影响。 正交法是通过正交表安排多因素实验，利用统计数学原理进行数据 分析的一种科学方法，它符合“以尽量少的试验，获得足够的、有效的信 息”的实验设计原则。正交试验法的程序为下列 八个步骤 ： 1 、 确定试验目的 。实验目的是多种多样的，如找出产品质量指标的最佳组 合、确定最佳工艺条件等。本实验的目的是为了提高酶的反应速度，提 高酶的活力。 2 、 选择质量特性指标 。应选择能提高或改进的质量特性及因素效应。对于 本实验来说就是产物（葡萄糖）生成量的多少。 3 、 选定相关因素 。即选择和确定可能对实验结果或质量特性值有影响的那 些因素，可人为控制与调节的因素，如温度、 pH 等。这些因素之间有相 互独立性。 4 、 确定水平 。水平，又称位级，是因素的一个给定值或一种特定的措施， 或一种特定的状态。水平也就是因素变化的各种状态。在确定水平时， 应考虑选择范围、水平数和水平位置。如本实验的温度水平可以选择 25℃、30 ℃、50 ℃三个水平。 5 、 选用正交表 。应从因素数、水平数以及有无重点因素需要强化考察等 各方面综合考虑选用正交表。一般情况下，首先根据水平数选用 2 或 3 系 列表，然后，以容纳试验因素数，选用实验次数最少的正交表。如有重 点考察的因素，则根据其多考察的水平数，选混合型正交表。 6 、 配列因素水平，制定实验方案 。按随机原则，把因素配列于选用的正 交表中，制定实验的顺序、时间等，即制定实验具体方案。 7 、 实施实验方案 。按实验方案，认真、正确地试验，如实记录各种实验 数据。 8 、 实验结果分析 。对实验中取得的各种数据进行分析。如从数据中直接 选出符合或接近质量特性期望值的实验条件组。如不能采用直观分析方 法，则应采用其他分析方法，确定各因素主次地位可用极差分析方法， 定量分析各个因素对实验结果的影响程度，则用方差分析方法 。 实验步骤 1 、实验设计： （ 1 ） 确定指标 ：即实验的结果。本实验的指标是酶活 力。这里，用 A 520 值表示。 （ 2 ） 制定因素水平表 ：水平是因素变化的范围（通常 是根据专业知识确定。如无资料可借鉴，应先加 宽范围再逐步缩小）内要进行实验的具体条件， 如下表 1 。 因素 水平 A 温度 （ ℃ ） B pH 值 C 底物浓度 （ ml ） D 酶浓度 （ ml ） 1 25 （ A1 ） 3.5 （ B1 ） 0.1 （ C1 ） 0.02 （ D1 ） 2 35 （ A2 ） 4.5 （ B2 ） 0.3 （ C2 ） 0.06 （ D2 ） 3 50 （ A3 ） 6.5 （ B3 ） 0.6 （ C3 ） 0.1 （ D3 ） 表 1 ：因素水平表 （ 3 ）选择正交表 ：可容纳三因素三水平的正交表有 L 9 （ 3 4 ）、 L 27 （ 3 13 ）、 L 18 （ 3 6 × 6 ）和 L 27 （ 3 8 × 9 ）。本实验不考察 各因素间的交互作用，也没设计混合水平，只有水平数 均为 3 的的四个因素，故选用 L 9 （ 3 4 ）表，见下表 2 。 因 素 试管号 1 （温度） 2 （ pH ） 3 （底物浓度） 4 （酶浓度） 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2 1 2 3 5 2 2 3 1 6 2 3 1 2 7 3 1 3 2 8 3 2 1 3 9 3 3 2 1 表 2 ：正交表 L