高效液相色谱仪组成及检测器种类课件.ppt

第三节 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪由 高压输液系统、进 样系统、分离系统、检测系统、记录系统 等五大部分组成。 1 1. 储液瓶（输液管 入口端安装有过滤 器）； 2. 高压输液 泵； 3. 混合器和阻 尼 器 ； 4. 进 样 器 （阀）； 5. 色谱柱； 6. 检 测 器 ； 7. 废 液 瓶； 8. 数据处理和 控制系统 2 HPLC 仪器结构示意图 贮液器 输液泵 梯度装置 进样装置 分离柱 控温装置 检测器 3 首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经 过进样器送入色谱柱，然后从控制器的出 口流出。当注入欲分离的样品时，流经进 样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱 柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器， 记录仪将检测器送出的信号记录下来，由 此得到液相色谱图。 工作过程： 4 一、高压输液系统 高压输液系统由 溶剂贮存器、高压泵、 梯度洗脱装置和压力表 等组成。 5 1. 溶剂贮存器 溶剂贮存器一般由玻璃、不锈钢或氟 塑料制成，容量为 1 到 2 L ，用来贮存足够 数量、符合要求的流动相。 6 2. 高压输液泵 高压输液泵是高效液相色谱仪中关键部件 之一，其功能是 将溶剂贮存器中的流动相以高 压形式连续不断地送入液路系统，使样品在色谱 柱中完成分离过程。 对泵的要求：输出压力高、流量范围大、流 量恒定、无脉动，流量精度和重复性为 0.5% 左右。此外，还应耐腐蚀，密封性好。 7 高压输液泵，按其性质可分为 恒压泵和 恒流泵 两大类。 恒流泵 是能给出恒定流量的泵，其流 量与流动相粘度和柱渗透无关。 8 9 ? 恒压泵 是保持输出压力恒定，而流量随外 界阻力变化而变化，如果系统阻力不发生 变化，恒压泵就能提供恒定的流量。 10 3. 梯度洗脱装置 梯度洗脱 就是在分离过程中使两种或两 种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改 变它们之间的比例，从而使流动相的强度、 极性、 pH 值或离子强度相应地变化，达到 提高分离效果，缩短分析时间的目的。 11 仅用弱溶剂 仅用强溶剂 梯度洗提 12 梯度洗脱装置分类 一类是 外梯度装置 （又称低压梯度）， 流动相在常温常压下混合，用高压泵压至柱 系统，仅需一台泵即可。 一类是 内梯度装置 （又称高压梯度）， 将两种溶剂分别用泵增压后，按电器部件设 置的程序，注入梯度混合室混合，再输至柱 系统。 13 二、进样系统 进样系统包括进样口、注射器和进样阀 等，它的作用是把分析试样有效地送入色谱 柱上进行分离。 14 通常使用耐高压的六通阀进样装置 , 其结构如图所示： 15 三、分离系统 色谱柱是液相色谱的心脏部件，它包 括柱管与固定相两部分。柱管材料有玻璃、 不锈钢、铝、铜及内衬光滑的聚合材料的 其他金属。 16 柱管材料： 耐腐蚀耐压 内径： 2.0 、 3.0 、 4.1 、 4.6mm 长度： 5 、 10 、 15 、 25cm 等 固定相： 颗粒细、圆、均一、刚性强 17 18 一般在分离前备有一个前置柱，前置 柱内填充物和分离柱完全一样，这样可使 淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的固定相 饱和，使它在流过分离柱时不再洗脱其中 固定相，保证分离技的性能不受影响。 柱子装填得好坏对柱效影响很大。 对于细粒度的填料（＜ 20μm ）一般采用 匀浆填充法装柱，先将填料调成匀浆，然 后在高压泵作用下，快速将其压入装有洗 脱液的色谱柱内，经冲洗后，即可备用。 柱温一般为室温或接近室温。 19 四、检测系统 检测器是液相色谱仪的关键部件之一。 对检测器的要求是： 灵敏度高，重复性好、 线性范围宽、死体积小以及对温度和流量的 变化不敏感等 。 20 在液相色谱中，有两种类型的检测器： 一类是 溶质性检测器 ，它仅对被分 离组分的物理或物理化学特性有响应。属 于此类检测器的有紫外、荧光、电化学检 测器等； 一类是 总体检测器 ，它对试样和洗 脱液总的物理和化学性质响应。属于此类 检测器有示差折光检测器等。 21 ㈠紫外光度检测器 22