第三章动物细胞工程制药 .pptxVIP

第三章 动物细胞工程制药;第一节 概述; 第一节 概述 1 细胞工程的定义 细胞工程 (cell engineering)是以细胞生物学和分子生物学为基础理论，采用原生质体、细胞或组织培养等试验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性，以获得具有新的性状的细胞系或生物体以及生物的次生代谢产物，并发展有关理论和技术方法的学科。 细胞工程的核心技术：细胞培养与繁殖 目的：获得新性状、新个体、新物质;2 细胞工程的研究范畴;思考题;第二节 动物细胞的形态和生理特征;1.贴壁细胞 生长须有贴附的支持物表面，自身分泌或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长。 两种形态：成纤维细胞型；上皮细胞型 2.悬浮细胞 生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长。如淋巴细胞。 3.兼性贴壁细胞 生长不严格依赖支持物。如中国地鼠卵巢细胞，小鼠L929细胞。 ;※二、动物细胞的生理特点;2.细胞生长需贴附于基质,并有接触抑制现象。 3.正常二倍体细胞的生长寿命是有限的。 原代培养 有限细胞系 无限细胞系 4.动物细胞对周围环境十分敏感; 对理化因素敏感，如：渗透压、pH、离子浓度、剪切 力、微量元素等。 ⒌动物细胞对培养基要求高 必需氨基酸、维生素、无机盐、微量元素、葡萄糖、细胞生长因子、贴壁因子等。 ⒍动物细胞蛋白质的合成途径和修饰功能与细菌不同。 动物细胞蛋白质的合成部位：游离核糖体；粗面内质网的核糖体 ; 由此可见，动物细胞生产药物 缺点:培养条件高、成本贵、产量低。 优点:分泌胞外、纯化方便、翻译后修饰糖基化，与天然产品一致。 ;思考题;第三节生产用的动物细胞的要求和获得;※二、生产用动物细胞的获得 1、原代细胞：由体内直接取出组织或细胞称为原代细胞。（原代培养即第一次培养，原代培养的细胞大约可以增殖10代）。细胞离体时间短，性状与体内相似，适用于研究。是直接取自动物组织器官,经过粉碎消化而获得的细胞悬液（109/g）。需要大量动物，费钱费劳力。鸡胚细胞、原代兔肾细胞、鼠肾细胞、淋巴细胞;2、二倍体细胞系：原代细胞经过传代筛选克隆，从多种细胞成分的???织中，挑选并纯化出某种具有一定特征的细胞株。包括几乎全部的动物，过半数的高等植物。 二倍体细胞有正常细胞的特点： ①染色体组型是2n核型； ②贴壁依赖接触抑制； ③可传代培养50代； ④无致瘤性。 ;3、转化细胞系：通过某个转化过程形成的，常由于染色体断裂变成异倍体，失去正常细胞特点，而获得无限增殖能力。转化过程可以是自发的，和人工的，从肿瘤组织中。更适合大规模工业化生产 特点：①细胞分裂不受细胞密度影响，无接触抑 制现象，性状不规则 ②具有无限生命力，倍增时间短 ③对培养条件、生长因子要求低 获得常用的方法：物理因子：UV、X-射线辐射 化学因子：致癌因子，如亚硝酸胍 病毒感染：较少用 ;4.融合细胞系：指两个或两个以上的细胞合并成一个细胞的过程。如：受精过程。 但通常情况下，两个接触的细胞并不会发生融合现象目前常用的融合方法有： （1）仙台病毒融合法：（很少使用） 融合过程：病毒加入两种细胞（4℃） 细胞聚集 病毒与细胞膜反应，细胞膜被破坏（37℃） 两个细胞连接穿通，周边修复 细胞融合 （2）聚乙二醇融合法:常用分子量=1000，浓度=50%，PH=8.0-8.2时融合率最高可达100% ;（3）电融合法：利用短时间的强电场作用下，细胞膜发生可逆性的电击穿，而使相邻的细胞的细胞膜发生继发性融合。 优点：操作简单，无化学毒性，融合同步，融合率高，可在显微镜下观察全过程。 决定因素：电场强度、脉冲宽度、温度、缓冲液的性质（PH、I和渗透压） 5.重组工程细胞系 可采用基因工程的手段构建各种工程细胞。;四、细胞库的建立;二、生产用细胞库 从原始细胞库来的，或从单一安瓿来，或从多个安瓿来即刻混合，经培养扩增再分装储存形成细胞库。 需建挡案，进行无菌性无细胞交叉污染的检查。需确定最高使用的传代数。 ;思考题;第四节 动物细胞培养条件和培养基;△动物细胞在体外培养成功的基本条件： 与细胞接触的所有设备、器皿、溶液保持绝对无菌 必须有足够的营养供应 有适量的氧气供给 需及时清理细胞代谢的有害产物 有良好的外界环境 及时分种，保持合适的细胞密度;一、动物细胞的培养条件;;△（2）器材的消毒灭菌 物理消毒：如紫外线、干热、湿热和过滤 化学消毒：如化学消毒剂、抗生素 2.水质 细胞培养的水必须进行特殊的处理，才能使用。 当前处理