各种细胞培养经验.docVIP

HePG2细胞和L-02细胞的传代：HePG2细胞屈人肝肿瘤的恒牛?细胞株，L-02细胞则是人胎肝细胞株，二者所使用的 培养基可以是一样的，即最常见的DMEM.： 一干使用低糖的。 细胞长满培养瓶时既要传代。使用胰酶消化即可。用D-Hanks液配制成0.25%的胰酶。使用前37度预热,细胞经PBS 淸洗两遍后，每个中号培养瓶加0.7ml的胰的，胰酶的最可根据fl己培养瓶的大小而定，原则就是能够盖满瓶底。加入 胰廨以后，为使廨的活性赧大，将堀养瓶盖拧紧后放冋培养箱中，3分钟左右即用含血淸的培养基终止消化。如果在室 泪情况下消化，时间相应加长，可以在显微镜卜观察，当细胞界限已十分浦楚，即已分离为单个细胞，n有少量细胞漂 起，则要终止消化了。 16HBE细胞株的传代方法： 镜下观察细胞牛长融合达70-80%,准备传代°常规开紫外照射超净台20分钟，同时把含10%胎牛血淸的MEM培养基、 0e 25%胰酶、PBS放置37度培养箱中孵育。20分钟后开始传代。先弃掉旧培养液,加PBS洗一次,然后加0。25% 胰酶2ml消化(指25乘25cm大小的培养瓶)细胞，镜下观察细胞，细胞突起冋缩，细胞变I员I,然后将培养瓶放置37 度二氣化碳培养箱中孵育3分钟左右(当然时间是随机的，比如：新配的胰卿作用时间短一些，配制时间长的胰期作用 时间会长一些，当然要不断地镜下观察)，待细胞大部分消化下來(大部分细