分子克隆工具酶图文(精).docxVIP

第二章 分子克隆工具酶 DNA 重组技术中对核酸的 “精雕细刻 ”主要用酶作为工具。 60 年代末， 70 年代 初科学 家们陆续发现了 DNA 连接酶、 T4 DNA 连接酶、Ⅱ型限制性核酸内切酶 Hin fI 和 Eco RI、反转录酶等，才使他 们能对 DNA 分子进行剪切、连接等基因操作，故称这些酶为工具酶。到目前为 止，世界上发现的工具酶种类和数量繁多，现将重组 DNA 分子技术中常的工具酶简介如下。限制性核酸内切酶（ restriction endonuclease）在重组 DNA 技术中有重要地位，在此较详细介绍。 第一节 限制性核酸内切酶 核酸酶可分为两类：核酸外切酶（ exonuclease）是从核酸的一端开始，一个接一个把核苷酸水解下来；核酸内切酶 (endonuclease则从核酸链中间水解 3’， 5’磷酸 二酯键，将核酸链切断。很多细菌和细胞中都能识别外来的核酸并将其分解， 1962 年发现这是因为细菌中含有特异的核酸内切酶，能识别特定的核酸序列而将核酸切 断 ;同时又伴随有特定的核酸修饰酶，最常见的是甲基化酶，能使细胞自身核酸特定的序列上碱基甲基化，从而避免受内切酶水解，外来核酸没有这种特异的甲基化修饰，就会被细胞的核酸酶所水解 .这样细胞就构成了限制一修饰体系，其功能就是保护自身的 DNA ，分解外来的 DNA ，以保护和维持自身遗传信息的稳定