磷酸化蛋白检测讲解.ppt

信号传导研究的高级助手 －高通量，多参数检测磷酸化蛋白 磷酸化蛋白检测与信号转导研究的关系 ? 磷酸化作为一种分子开关，能够动态调节酶活性及蛋 白蛋白相互作用，可形成一系列蛋白次序磷酸化的级 联反应将信号快速传递，因而广泛存在于各种信号传 导途径； ? 蛋白磷酸化是细胞信号传导的关键步骤，在细胞代谢 、生长、增殖、凋亡、癌变和其他生命过程中都扮演 着重要角色。如与 MAPK 通路密切相关的 EGFR ， ERK ， p38 ， Caveolin 以及 STAT 通路相关蛋白都是通过磷 酸化和去磷酸化改变蛋白活性，借以传递信号，调控 细胞的生命活动。 ? 癌症、感染、炎症以及其它疾病往往伴随着异常的蛋 白磷酸化现象，因此，这些磷酸化蛋白也是药物研发 人员感兴趣的靶分子 磷酸化蛋白检测的常用方法 ? 最常用地方法是利用 32P 标记的无机磷酸盐（ 32Pi ）进 行生物合成标记 ? 对蛋白磷酸化的研究一般依靠传统的 Western blot 方 法和蛋白激酶实验（ enzymatic kinase assays ） ? 高通量磷酸化蛋白定量检测技术－－液相蛋白芯片技 术 ? 磷酸化蛋白多参数检测－－胞内流式细胞术 P P 非磷酸化特异性抗体 ? 检测总蛋白 : 非磷酸化蛋白＋磷酸化蛋白 ?