枯草芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程.docxVIP

枯草芽孢杆菌活菌数的测定操作规程 文件编号 文件名称 编制日期 年 月 日 颁发部门 编 制 人 审 核 人 审核日期 年 月 日 印制份数 批 准 人 批准日期 年 月 日 生效日期 年 月 日 分发部门 质量管理部、生产部 目 的：建立枯草芽孢杆菌活菌数含量的测定标准操作规程 范 围：本方法适用于的枯草芽孢杆菌活芽孢的测定 责 任 人： 内 容： 1. 仪器与工具：电子天平、生物显微镜、摇床、 18 × 180mm 试管、 500ml 三 角瓶、 10ml 刻度吸管、 1ml 刻度吸管 ．试剂与试液：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠、无菌蒸馏水、等。 检测培养基配方：牛肉膏 3g 、蛋白胨 10g 、琼脂 16g 、氯化钠 5g 、蒸馏水 1000ml ，调至 PH7.2 ，121 ℃灭菌 30min 。 检测步骤： 4.1 菌液制备：采样量不少于 500g ，从所采的样品中精确称取 10.00g 试样， 加入已灭菌的带玻璃珠（玻璃珠在 80 个左右）的 500ml 锥形瓶中，加入 90ml 已灭 菌的无菌水，在摇床上 200r/min 摇动 60min ，即成母液的菌悬液。 4.2 用 1ml 无菌吸管吸取 1ml 上述母液的菌悬液，加入 9ml 无菌水混匀成 1 ： 1 ×10 2 稀释的菌悬液，这样依此稀释，直至得到 1：10 6 ；1 ：10 7 ；1 ：10 8；1 ：10 9 等浓度（每个稀释度必须更换无菌吸管）。 4.3 向每个灭菌培养平皿中倒入约 12ml 培养基，混合均匀，待凝固后备用。 4.4 用  1ml  无菌吸管分别吸取不同稀释浓度菌悬液  0.2ml  ，加至已凝固好的培养 基中，用涂布棒涂匀，在无菌操作台中静置  30min  后，倒置于  37 ℃的恒温培养箱内 培养  18h  —24h  。每个样品取  3 个连续适宜稀释度，每个稀释度重复  3 次，同时加入 无菌水的空白对照，每个稀释度取  5 个到  10  个菌落的菌体，涂片染色，显微镜观察 识别后计数菌落。 5. 菌落计数： 5.1 以平板上出现 20 个—— 200 个菌落数的稀释度平板为记数标准，并确定为 稀释倍数。 5.2 当只有一个稀释度，其平均菌落数在 20 个—— 200 个之间时，则以该平均 菌落数乘以其稀释倍数。 5.3 若有两个稀释度，其平均菌落数在 20 个—— 200 个之间时，应按两者菌落 数之比值来决定。 、结果统计与计算 根据菌落数特征判定，分别数出平板中的枯草芽孢杆菌菌数及杂菌数（杂菌是指 除枯草芽孢杆菌外的其他菌种）。统计算出同一稀释度三个平皿上菌落平均数（ B ） 和杂菌数（ E ）。 6.1 有效活菌总数按式（ 1）计算； A=10 × B×C×5 (1) 式中： A——有效活菌总数， cfu/g ——菌落活菌数； C——稀释倍数。 6.2 杂菌率按式（ 2）计算： E D= × 100 (2) E+A 式中： D ——杂菌率， % ——杂菌数。