深入实验三质粒的提取.pptVIP

4. TE缓冲液 10 mmoL/L Tris·HCl (pH8.0) 1 mmoL/L EDTA (pH8.0) 5. 70%乙醇 (放-20℃冰箱中,用后即放回) 6. 胰RNA酶 将RNA酶溶于10mmoL/L Tris·HCl(pH7.5)、15mmoL/L NaCl中, 配成10mg/mL的浓度, 于100℃加热15min, 缓 慢冷却至室温,保存于-20℃。 7. 凝胶加样缓冲液（6X）：40%蔗糖、0.25%溴酚兰。;【实验步骤】;5. 加200μL溶液Ⅱ（新鲜配制），盖紧管盖，混匀内溶物，将离心管放冰上5 min。 6. 加入150μL溶液Ⅲ（冰上预冷），盖紧管口，颠倒数次使混匀，冰上放置15 min。 7. 12000 r/min离心15min，将上清转至另一离心管中。 8. 向上清中加入等体积酚:氯仿（1:1）或氯仿:异戊醇(24:1)（去蛋白），反复混匀，12000 r/min离心5 min，将上清转移到另一离心管中。;9. 向上清中加入2倍体积无水乙醇，混匀后，室温放置5～10 min。12000 r/min离心5 min。倒去上清液，把离心管倒扣在吸水纸上，吸干液体。 10. 用1 mL 70％乙醇洗涤质粒DNA沉淀，振荡并离心，倒去上清液，真空抽干或空气中干燥。 11. 加50μL TE缓冲液，(其中含有20μg/