维生素测定方法.pptVIP

2021/3/26 * 二、维生素B 2的测定 维生素B2即核黄素,在食品中以游离形式或磷酸酯等结合形式存在。膳食中的主要来源是各种动物性食品,其中以肝、肾、心、蛋、奶含量最多,其次是植物性食品的豆类和新鲜绿叶蔬菜。 分析方法: GB/T 5009.85—2003中第一法为荧光法。 第二法为微生物法。 2021/3/26 * 原理 核黄素在440-500nm波长光照射下发生黄绿色荧光,在稀溶液中,荧光强度与核黄素浓度成正比。在波长525nm下测定其荧光强度。试液再加入低亚硫酸钠(Na2S2O4),将核黄素还原成无荧光的物质,然后再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度,两者之差即为食品中核黄素所产生的荧光强度。 2021/3/26 * 操作步骤 样品均制→水解→过滤定容→氧化去杂质→净化→测定→结果计算 2021/3/26 * 样品提取 水解: 称取2-10g样品（约含10-200ug核黄素）于100mL三角瓶中,加入50mL 0.1mol/L盐酸,搅拌直至颗粒分散均匀。用40mL瓷坩埚为盖扣住瓶口, 置于高压锅内高压水解,10.3X104Pa(15lb/in2)30min。水解液冷却后,滴加1mol/L氢氧化钠,取少许水解液,用0.04%溴甲酚绿检验呈草绿（pH为4.5） 2021/3/26 * 酶解: 含有淀粉的水解液:加入3ml 10%淀粉酶溶液,于37-40℃保温16h。含高蛋白的水解液:加入3ml 10%木瓜蛋白酶溶液,于37-40℃保温16h。过滤上述酶解液定容至100mL,用干滤纸过滤。此提取液在4°C冰箱中保存一周。 2021/3/26 * 氧化去杂质 视样品中核黄素的含量取一定体积的样品提取液及核黄素标准使用液（约含1-10ug核黄素）分别于20mL的带刻度试管中,加水至15mL。各管加0.5mL冰乙酸,混匀。加3%高锰酸钾溶液5mL,混匀,放置2min,使氧化去杂质。滴加3%双氧水溶液数滴,直到高锰酸钾颜色褪掉。剧烈震摇此管,使多余的氧气逸出。 2021/3/26 * 核黄素的吸附与洗脱 核黄素吸附柱: 硅镁吸附剂约1g用湿法装入柱,占柱长1/2-2/3（约5cm）为宜（吸附柱下端用一团脱脂棉垫上）,勿使柱内产生气泡,调节流速为60滴/min。 2021/3/26 * 过柱与洗脱: 将全部氧化后的样液及标准液通过吸附柱后,用约20mL的热水洗去样液中的杂质,然后用5.0mL洗脱液（丙酮:冰乙酸:水＝5:2:9）将样品中核黄素洗脱并收集于一带盖10mL刻度试管中,再用水洗吸附柱,收集洗出液并定容至10mL,混匀后待测荧光。 2021/3/26 * 测定 于激发波长440nm,发射波长525nm,测量样品管及标准管的荧光值。 待测品及标准的荧光值测定后,在各管的剩余液（约5-7mL）中加 0.1mL 20%次亚硫酸钠溶液,立即混匀,在20s内测出各管的荧光值,作为各自的空白值 2021/3/26 * 计算 X=(A-B/C-D) ×S/m×f×100/1000 式中:X ——样品中含核黄素的量,mg/100g A ——样品管荧光值 B ——样品管空白荧光值 C ——标准管荧光值 D ——标准管空白管荧光值 f ——稀释倍数 m ——样品的质量,g S ——标准管中核黄素的含量, μg 100/1000——将样品中核黄素量由μg/g折算 mg/100g的折算系数。 2021/3/26 * 食物中烟酸的测定－微生物法 GB/T 5009.89-2003 原理 某一种微生物的生长,必需有某些维生素,例如L.arabinosus17-5的生长需要烟酸,培养基中若缺乏这种维生素该细菌便不能生长。在一定条件下,该细菌生长情况,以及它的代谢物乳酸的浓度是与培养基中该维生素的含量成正比的,因此可用酸度或混浊度的测定法来测定样品中烟酸的含量。 2021/3/26 * 面粉中叶酸的测定方法 原理 叶酸盐的活性通过干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）的生长情况来评价。 2021/3/26 * 5种水溶性维生素的HPLC法测定 采用HPLC法测定