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2021-04-01 发布于广东
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沙门氏菌快速检测方法.docx

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Revised by Hanlin on 10 January 2021 Revised by Hanlin on 10 January 2021 沙门氏菌快速检测方法沙门氏菌快速检测方法 1试剂与仪器 1.1所用器具三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针 1.2仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅 1.3所用试剂和培养基 1.3.1缓冲蛋白胨水（BPW）称取BPW培养基20.1g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，以90mL/瓶分装到各锥形瓶，并于121℃灭菌15min，冷至常 1.3.2四硫磺酸钠煌绿（TTB）增取TTB增菌液基础93.6g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于锥形瓶中，每瓶100mL。将锥形瓶放入灭菌锅中，121℃灭菌20min；冷至30℃ 2、操作步骤 2.1配制BPW培养基（第一天） 2.2培养基冷却至室温后，对培养基和整个房间进行紫外灭菌15分钟,关灯60min后使用。（第一天） 2.3预增菌（第一天）称量样品10g至含BPW培养基的锥形瓶，并及时盖上盖子，150rpm下振荡10min，于36℃±1 2.4配制TTB增菌液（第一天） 2.5增菌（第二天） 2.5.1 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL，转种于9mLTTB增菌液内，于42℃±1℃培养18h～ 2.5.2 菌名菌号生长状况 TTB培养特征伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50071 良好静置后浑浊鼠伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50115 良好静置后浑浊大肠埃希氏菌 ATCC25922 不生长静置后清亮 2.6配制沙门氏菌显色培养基平板（第二天） 2.6.1取瓶内干粉4.75g，用100mL蒸馏水溶解，可按比例扩大或者缩小。 2.6.2混合加热至100℃，搅拌加热至完全溶解，冷却至 2.6.3样品用画线或者涂布法接种，37℃ 2.6.3观察菌落颜色：（第三天）菌名菌号生长状况培养特征伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50071 良好品红色或者紫红色菌落大肠埃希氏菌 ATCC25922 生长蓝-绿色菌落其他革兰氏阴性菌生长/不生长无色