实验一质粒的小量制备.pptVIP

pGEX-6p质粒载体菌, LB培养基1000ml（含100ug/ml氨苄青霉素）， 葡萄糖/Tris/EDTA(GTE)溶液（溶液 I）， NaOH/SDS溶液(溶液 II)，KAc溶液（pH4.8）(溶液 III)， RNase A， 95%乙醇，70%乙醇， TE buffer（pH8.0）。 二 实验试剂 1 氨苄青霉素储存液（无菌水配制5mg/ml，分装后-20C保存）， 2 配制LB培养基 （胰化蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g加200mL dd water 搅拌完全溶解，用约200L 5N NaOH调pH至7.0，加dd water至1L，121C 20min灭菌）； 三 实验准备 3溶液I（50mmol/L葡萄糖，25mmol/L Tris HCl pH8.0，10mmol/L EDTA pH8.0）； 溶液Ｉ可成批配制，每瓶约100ml,在10lbf/in2(6.895¡104Pa) 高压下蒸气灭菌15分钟，贮存于4℃。 溶液II（0.2mol/L NaOH，1% SDS）； 溶液III（60mL 5mol/L Kac，加冰乙酸调pH4.8，补dd water至100ml）， 三 实验准备 4 70%乙醇（-20C保存）， 5 TE buffer（10mmol/L Tris HCl pH8.0，1mmol/L EDTA pH