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实验方法总结（3）:动物模型部分 TOC \o 1-5 \h \z 1、 研究肿瘤细胞增殖 1 2、 研究肿瘤细胞转移 2 体外（浸润模型） 2 体内（转移模型） 2 3、 研究肿瘤细胞耐药 4 耐药细胞株的建立 4 裸鼠移植瘤耐药模型的建立 5 从肿瘤起源分，肿瘤动物模型的分类如下: 实验动物肿 ,瘤模型 I 自发性肿瘤 L 模型诱发性肿瘤模型移植性肿瘤模型人体肿癌的.异种移植性/原位诱发异位诱发 自发性肿瘤 L 模型 诱发性肿瘤模型 移植性肿瘤模型 人体肿癌的.异种移植性/ 原位诱发 异位诱发 原位移植 异位移植 同种可移植L 性肿瘤丿 异种可移植 、性肿瘤 从研究目的来分，可以从增殖、转移、耐药三个角度来分析： 1、研究肿瘤细胞增殖 细胞准备：GeneA敲减慢病毒感染细胞扩增至需要的细胞量。分为：空白对照 组、阴性对照组、实验组 取Balb/c裸鼠，雄性，6周龄，每组10只，适应一周后进行肿瘤细胞注射 XXX细胞消化离心后制成单细胞悬液，计数后取适量的细胞用 PBS悬浮，在 Balb/c裸鼠侧腹部皮下接种。每只接种 2X 106个细胞，注射体积为100此。 此后，每隔5天测量注射部位肿瘤的体积。30天后裸鼠小鼠腹腔注射80 mg/kg 戊巴比妥钠，小鼠麻醉后置蓝色背景布上拍照（侧卧位，接种部位朝上），小鼠 颈椎脱臼处死，取出肿瘤称重，将肿瘤置蓝色背景布上拍照，肿瘤一分为二，一 份4%多聚甲醛固定，待后续病理分析，一份-80 °C冻存。 2、研究肿瘤细胞转移 肿瘤转移的模型包括两大类：体外（浸润模型）和体内（转移模型）。体外（浸润模 型）：了解肿瘤细胞对周围相连组织的侵润性。体内模型主要研究肿瘤细胞的转 移性即肿瘤细胞在远端组织形成病灶的能力。 2.1.体外（浸润模型） 例：浸润型脑胶质瘤动物模型的建立 方法：取若干只Balb/c免疫缺陷裸鼠，将分离和鉴定并转染携带绿色荧光蛋白 的脑胶质瘤干细胞立体定向法行小鼠颅内接种，每组 10只。小鼠麻醉后头部正 中切口，剥离骨膜后钻孔（坐标是冠状缝后0.5 cm，矢状缝右侧2.5 cm）。取2 此胶质瘤干细胞以1 X 104 cells /只小鼠的剂量，经微量注射器缓慢注射入鼠脑 纹状体内（深度是2.5?3 mm）。在确定的时间点处死一部分动物进行荧光（立 体荧光显微镜下）病理证实和比较，同时检查脑胶质瘤干细胞的体内生长特征以 及干细胞标志物等。 2.2.体内（转移模型） 例：肩胛部皮下接种的方法建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型， 目的：观察壮骨镇痛胶 囊对裸鼠乳腺癌移植瘤模型 骨转移相关指标整联蛋白a V閃（ITG-aV閃）及骨唾 液酸蛋白（BSP表达的影响。 方法：取处于对数生长期的 乳腺癌细胞MDA-MB-231，用0.25%胰蛋白酶消化 制成单细胞悬液，收集细胞，细胞计数板法计数，调节细胞浓度为2 X 107个/mL , 按0.2 mL/只接种于裸鼠右前肢肩胛上区，接种部位可以见一皮丘，质软， 2天 后，皮丘基本吸收，10天后接种部位可触及米粒大结节，质硬，即乳腺癌移植 瘤组织。检测壮骨镇痛胶囊对移植瘤组织中IGT- av J33和BSP表达的影响。 例：原位移植建立人 肾透明细胞腺癌 裸鼠转移模型，观察肿瘤病理学特征。 方法：收集体外培养的对数生长期 786-0细胞（人肾透明细胞腺癌细胞），进行 裸鼠皮下注射，待皮下移植瘤长至直径为 1.5cm左右时取出，以相同方法进行 鼠间传代（每代2只），3?4代后取出移植瘤，剪成1mm 3大小进行肾包膜下 原位接种，获人肿瘤裸鼠转移模型，即外科原位移植（ Surgical Orthotopic Implantation ，SOI）模型，裸鼠垂死时脱颈处死，取出肺脏转移灶体外培养， 胰酶消化传代4?5次后即获得较纯的肿瘤细胞，命名为 786-0-LM1。同时采用 786-0细胞悬液进行肾包膜下原位注射，建立细胞原位注射模型。 肿瘤的常见转移an位 膀胱癌 淋巴结、肾、泌尿生殖东统.膻膜 胞肿瘤 脑膜 乳腺庖 骨*肺* UK淋巴结.脑r骨髓 言颈癌 骨、肺.肝*淋巴结.肾、泌尿生殖系统 结肠癌 肺*肝*淋巴结*肾.泌尿生殖系统 負管癌 淋巴结、骨、月乱 肝、肾上腺 头颈部肿瘤 阪 皮肤、淋巴结 肝癌 骨.肺*淋巴结 肾癌 骨.肺.肝、淋巴结、脑 白血病/淋巴瘤 骨、骨謎、皮肤*月市、淋巴结、脑 肺匾 骨.骨舐 肝.淋巴结，脑、肾.泌尿生殖家统 黑色秦倆 骨，肺*肝，淋巴结 冒髓、皮肤、脑 卵巢癌 肺，肝，淋巴结挥肠’腹膜 胰腺癌 肺、肝.肠.淋巴结 前列腺癌 骨、骨ftt月市、肝、淋巴结 肉瘤 肺、肝出淋巴结 胃癌 骨.肺、肝.淋巴结 舉丸癌 骨.肺*肝.淋巴结 甲状腺癌 骨.肺.淋已结 子官癌 骨 3