碱性磷酸酶米氏常数的测定TE统讲.pptVIP

三、[试剂与器材] 1．0.04mol/L 基质液 2．0.1mol／L碳酸盐缓冲液pH10(37℃) 3．碱性溶液 4．0.5％铁氰化钾 5．0.3％ 4-氨基安替比林 6．酚标准液(0.1mg/mL) 7．37℃恒温水浴锅 8．可见光分光光度计;四、[操作步骤] 1．酚标准曲线的绘制 ： 酚含量（μg）： 0 5 10 20 30 40 (2)混匀后室温放置15分钟，于510nm波长处比色。 (3)以酚含量(μg)为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制酚标准曲线 ;2. 底物浓度对酶促反应速度的影响 最终基???浓度单位：μmol/ml (2)加入血清后，各管混匀并且立即记录时间，将上述各管置37℃水浴中准确保温15分钟。 (3)保温结束，立即加碱性溶液1.1mL终止反应。 ; (4)各管分别加入0.3％ 4-氨基安替比林1.OmL，0.5％ 铁氰化钾2.0mL，充分混匀，放置10分钟，以6号空白管作对照，于510nm波长处比色测定，根据酚标准曲线计算酶活性。 (5)以各管基质浓度的倒数1/[S]为横坐标，以各管吸光度的倒数或者以酶活性单位的倒数1/V作纵坐标，作