科研实验二蛋白质等电点及含量测定.pptVIP

蛋白质含量的测定 双缩脲法测定蛋白质含量 11 【实验原理】——双缩脲法测定蛋白质含量 双缩脲（NH3CONHCONH3）是两分子尿素经180℃左右加热，放出1个分子氨后得到的产物。 在强碱性溶液中，双缩脲能与Cu 形成紫红色络合物，称为双缩脲反应。 凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过1个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。蛋白质含有多个肽键，可发生双缩脲反应。 2+ 12 【实验原理】——双缩脲法测定蛋白质含量 紫红色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，颜色深浅可在540 nm比色测定，故可用此法来测定蛋白质含量。测定的蛋白质浓度范围为1-10 mg/mL。 此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 13 实验仪器 6支15mL玻璃试管、移液管、吸耳球、移液枪（200uL）、枪头（200uL）、可见光分光光度计等。（绘制标准曲线） 2支15mL玻璃试管、移液管、吸耳球、移液枪（200uL）、枪头（200uL）、可见光分光光度计等。（样品测定） 实验材料和试剂 双缩脲试剂、标准牛血清蛋白、蒸馏水、待测样品（可以用酪蛋白溶液，也可用牛乳中提取的酪蛋白）。 【仪器试剂耗材】——双缩脲法测定蛋白质含量 14 【操作步骤】——