酶工程酶发酵生产.pptVIP

酶工程酶发酵生产 生产工艺-工艺流程-胞内 生产工艺 —— 培养基 生长因子 —— 酶生产时需要供给微生物生长所需的氨基酸、维生素、嘌呤碱和嘧啶碱等生长因子。一般通过加入玉米浆、酵母膏、麸皮、米糠，以及豆饼等来提供。例如：添加含有生长因子的大豆酒精提取物，可使米曲酶的蛋白酶产量提高1.9倍。 产酶促进剂 —— 少量加入之后能显著增加酶产量的物质。一般都是酶的诱导物或表面活性剂。例如纤维素能诱导纤维素酶，吐温80可提高多种酶的产量。表面活性剂提高酶产量的作用机制目前还未完全了解，使用时必须考虑其对微生物是否有毒性。生产上提高胞外酶的活力，一般都采用非离子表面活性剂。 碳源、氮源、无机盐 生产工艺 —— 工艺控制 pH值的影响及控制 —— 酶生产的合适pH 通常和酶反应的最适pH值相接近。生成碱性蛋白酶的芽孢杆菌宜在碱性环境下培养；生产酸性蛋白酶的青霉和根霉应在酸性环境下培养。 温度控制 —— 为了有利于菌体生长和酶的合成，可进行变温生产。例如枯草杆菌AS1.398进行中性蛋白酶生产时，培养温度从31oC逐渐升温至40oC，然后再降温至31oC进行培养，产量提高66%。 重组E. coli一般先37?C培养，加诱导剂后28?C产酶。 生产工艺 —— 工艺控制 生长期与产酶的关系 —— 微生物生长期与产酶有一定的关系，因菌种而异常。如曲霉的蛋白酶当菌体生长进入对数生长期时大量分泌；芽孢杆菌的碱性蛋白酶在对数生长期末大量形成芽孢时才生成。 通气搅拌的影响 —— 酶生产所用的菌种一般都是需氧微生物，培养时都需要通气搅拌。一般，通气量少对霉菌的孢子萌发和菌丝生长有利，对酶生产不利。因此必须根据不同的需要控制不同时期的通气量。 生产工艺 —— 提取 发酵液预处理 酶的沉淀或吸附 （盐析法、有机溶剂沉淀法或白土或活性氧化铝吸附） 干 燥 （收集沉淀进行干燥磨粉，加入适当的稳定剂、填充剂等制成酶制剂；或在酶液中直接加入适当的稳定剂、填充剂，直接进行喷雾干燥） 酶的提取： 酶制剂产品 液体酶 固体酶 生产工艺—造粒 酶粒是在大型连续运转的水平混合机内生产出来的。提取的酶与盐、纤维素及其他成分混合形成0.5mm大小的粒状物。然后用一种聚合体包裹，以防止酶尘在使用过程中可能引起的致敏危险。 造粒对顾客及包含酶的最终产品来说，都是一种非常有效和安全的运输固态酶的方式。 用多聚体包裹酶以减少酶尘引起的致敏危险。 第二章 酶的发酵生产 酶的发酵生产 第一节 酶生物合成的基本理论 第二节 酶发酵生产常用的微生物 第三节 发酵工艺条件及控制 第四节 酶发酵动力学 第五节 动植物细胞培养生产酶 第一节 酶生物合成的基本理论 一、RNA的生物合成——转录 二、蛋白质的生物合成——翻译 三、酶生物合成的调节 一、RNA的生物合成—转录 转录是以DNA为模板，以核苷三磷酸为底物，在RNA聚合酶（转录酶）的作用下，生成RNA的过程。 转录速度表达式? 二、蛋白质的生物合成—翻译 翻译：以mRNA为模板，以氨基酸为底物，在核糖体上通过各种tRNA，酶和辅助因子的作用，合成多肽的过程。 四个阶段 1、氨基酸活化生成氨酰－tRNA 2、肽链合成的起始 3、肽链的延伸 4、肽链合成的终止 思考:密码子偏爱性与翻译速率? 第二节 酶发酵生产常用的微生物（酶的生产菌种） 一、产酶菌种的要求 二、常用的产酶微生物 三、利用微生物产酶的优点 四、高纯菌种的获取 一、产酶菌种的要求 1、发酵周期短，产量高； 2、容易培养和管理； 3、产酶稳定性好，不易变异退化，不易被感染； 4、有利于酶的分离和纯化； 5、安全性可靠，非致病菌。 二、常用的产酶微生物 1、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 2、大肠杆菌(Escherichia coli) 3、黑曲霉(Aspergillus niger) 4、米曲霉(Aspergillus oryzae) 5、青霉(Penicillium) 6、木霉(Trichoderma) 7、根霉(Rhizopus) 8、毛霉(Mucor) 9、链霉菌(Streptomyces) 10、啤酒酵母(Saccharomyces Cerevisiae) 11、假丝酵母(Candida) 微生物发酵法 微生物 酶 ①微生物种类繁多，制备出 的酶种类齐全，几乎所有的 酶都能从微生物中得到 ②微生物繁殖快、生产周期 短、培养简便，并可以通过 控制培养条件来提高酶的产量 ③微生物具有较强的适应性和 应变能力，可以通过适应、诱 导、诱变以及基因工程等方法 培育出新的产酶高的菌株 优点 商品酶的主要生产方法 微生物发酵法 高产 优良 菌株 培养 和 繁殖 代谢 和 积累 分离 和 纯化 酶制剂 酶的