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- 2021-04-10 发布于江苏
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Lipfectamine 2000 (脂质体转染试剂)特点和操作流程
Lipofectamine 2000是最为人熟知的转染产品之一。已知可为517种细胞(见下面连接地址)提供高转染效率(表达转基因细胞的百分数)和活性(细胞抽提物中转入基因的酶产物活性)。
特点 两个关键性特点使得Lipofectamine 2000试剂的转染步骤快速简便:
(1)DNA-阳离子脂质体试剂的复合体可以直接加入到细胞培养基中,有血清也不怕
(2)转染后不需要除去Lipofectamine 2000试剂,无需换培养基
操作流程 事实上Lipofectamine系列产品操作流程都是又快又简单:稀释DNA以及Lipofectamine 2000,混合2种稀释液保温20分钟,加入培养细胞中孵育24-96小时检测结果。下面是Invitrogen提供的详细流程和注意事项。
转染前一天,胰酶消化细胞并计数,细胞铺板,使其在转染日密度为90%。细胞铺板在0.5ml含血清,不含抗生素的正常生长的培养基中。
对于每孔细胞,使用50μl无血清培养基(如OPTI-MEMⅠ培养基)稀释0.8μg-1.0μg DNA。
对于每孔细胞,使用50μl OPTI-MEMⅠ培养基稀释1μl-3μl LIPOFECTAMINE 2000试剂。Lipofectamine 2000稀释后保温5分钟(在30分钟内同稀释的DNA混
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