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固相萃取原理和操作方法 　固相萃取 　1. SPE 技术的原理类型及操作方法 　SPE又称之为固液萃取(Solid Liquid Extraction, SLE) 是一个包括液相和固相的物理萃取过程,萃取过程中固相对分析物的吸附力大于样品基液,当样品通过固相柱时分析物吸附在固体填料表面,其它样品组分则通过柱子分析物可用适当溶剂洗脱下来,从而达到分离和净化的目的,根据S P E 柱中填料的不同S P E 有3 种类型,即反相萃取,正相萃取和离子交换萃取. 正相SPE 所用的吸附剂都是极性的如键合硅胶,氧化铝,硅镁吸, 弗罗里硅土(2MgO·3SiO2)附剂等;用来萃取极性物质;反相SPE,所用的吸附剂通常是非极性的或是弱极性的如C8,C18,苯基柱等,所萃取的目标化合物通常是中等极性到非极性的;化合物离子交换型SPE 所用的吸附剂是带电荷的离子交换树脂如LC-NH2( 含脂肪族季氨丙基键合硅胶), LC-SCX(含脂肪族磺酸基键合硅胶),等所萃取的目标化合物是带电荷的化合物. 　根据分析物的性质和分离要求可选择不同的萃取模式包括样品净化样品浓缩和除去样品基液不同类型的萃取S P E 操作方法略有不同对于反相萃取而言基本程序一般包括:S P E 柱的活化,样品添加SPE 柱,洗涤和干燥,分析物的洗脱等几个步骤.一般先用极性有机溶剂对固相柱进行活化,再用水或适当的缓冲液冲洗小柱,转移过多的甲醇,以便样本与固相表面发生作用,然后将经适当处理的样品液添加于固相柱中,用正压或负压使样品保持一定的流速通过柱子,再用适当的洗涤剂选择性地洗去杂质而分析物保留在柱子上,最后固相柱经干燥后选取合适的洗脱剂选择性地将分析物洗脱下来. 　以上详述了化合物在固相萃取方法中是如何保留的基本原理。对键合硅胶可能有二级相互作用的存在。 　对反相键合硅胶，基本原理是非极性的相互作用。然而，由于硅胶只是主体，有一少部分硅甲醇存在，这就有一些极性二级相互作用（正如我们在正相固相萃取取所谈）将要发生。如果非极性溶剂不能有效地从反相固相萃取填料上洗脱化合物，就有必要加些极性溶剂（如甲醇），以破坏极性相互作用而保留的化合物。在这种情况下，甲醇与硅胶上的羟基形成氢键，打断了分析物与硅胶上的羟基形成的氢键。 　硅甲醇在硅胶表面，Si-OH，也可为酸性，当pH大于4时，以Si-O-型式存在。这时在硅胶基体上也可能发生阳离子交换的二级相互作用，能吸附阳离子或碱性分析物。在这些情况，调整洗脱溶液的pH非常重要，以破坏这些相互作用而洗脱分析物（酸中和硅甲醇或碱中和分析物）。可选用含有酸的甲醇（98%甲醇、2%浓盐酸）或者含有碱的甲醇（98%甲醇、2%浓氢氧化氨），或者用一种熔于甲醇的非极性有机溶剂来洗脱。 　正相键合硅胶通过其键合基团展示了极性保留机理，但是也有一些二级相互作用发生在分析物与联接键合基团的烷基链之间。在这种情况下，更非极性的溶剂或极性—非极性混和溶剂可用来做洗脱溶剂。作为反相键合硅胶，硅胶基体与分析物之间的二级相互作用和阳离子交换作用也可能发生。 　离子交换键合硅胶不仅能提供这种分析物与硅胶上部分非极性基团之间的非极性二级相互作用，而且还有分析物与硅胶基体之间的极性和阳离子交换作用。要从这些填料上洗脱分分析物，一个准确的pH、离子强度和有机物的含量是必要的。 　固相萃取中的PH影响 　用在固相萃取中的溶液有很大pH范围的溶液有。硅胶作为基体原料，如高压液相色谱柱，通常稳定的pH范围是2-7.5。当pH高于和低于这个范围，键合相就会水解和从硅胶上断链下来，或者硅胶本身就溶解了。然而，在固相萃取中，常常溶液只与吸附剂接触较短的时间。实际上固相萃取管都是一次性使用，允许任何pH溶液以达到最佳保留和洗脱效果。如果固相萃取管对pH极限的稳定性非常重要时，聚合或碳键合固相萃取材料均可选用，如ENVI-Chrom P或ENVI-Carb。这些材料在1-14pH范围内都是稳定的。 　对于键合硅胶上反相固相萃取过程，如果希望保留分析物，预处理的溶液和样品（基本上或全部为水溶液）的pH应调至最适宜分析物保留。如果，分析物是酸或碱性的，通常情况下，使用的pH应该阻止化合物带电荷。中性化合物（无酸性和碱性基团）的保留，一般不受pH影响。相反，也能调节pH，使样品中不需要的化合物保留在固相萃取的填料上，而分析物则不被保留而流出。在适当的pH，分析物的再次亲水性和阳离子交换作用则能被利用。 　吸附剂(如ENVI-Chrom P和ENVI-Carb)用于反相条件，则应选择pH，使分析物最大程度地保留在反相硅胶上。一般使用有机溶剂洗脱时，这一点上的pH无足轻重。令人吃惊的是，当溶液在中性pH条件下，苯酚可带电荷，它能更好的保留在ENVI-Chrom P上，而不是溶液在酸性pH，苯酚不带电荷的情况。这