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浙江大学 硕士学位论文 Myosin Va在中华绒螯蟹精子发生中参与顶体发生和细胞核形变 姓名：孙晓 申请学位级别：硕士 专业：细胞生物学 指导教师：杨万喜浙江人学硕士学位论文 浙江人学硕士学位论文 摘要 摘要 精子发生是由原始生殖细胞发育为单倍体精子的高度有序的过程，分为有 丝分裂期、减数分裂期和精予形成期。中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)属于甲 壳纲、十足目、短尾类，其精子形态独特，属于无鞭毛精子，细胞核呈杯状包 裹在顶体外。Myosin Va是微丝依赖性的分子马达，在哺乳动物的精子形成中参 与顶体形成和囊泡运输。鉴于中华绒螯蟹和哺乳动物精子形态的巨大差异，本 研究旨在探索myosinVa在中华绒螯蟹精子发生中的作用。 我们在中华绒螯蟹的精巢中克隆了myosin Va的cDNA序列，此eDNA序 列长6046 bp，开放阅读框为5331 bp，编码1776个氨基酸。序列分析表明 myosinVa含有头部、颈部和尾部三个结构域。组织表达的RT-PCR表明 myosinVa在中华绒螯蟹的精巢、肝胰腺、鳃、心脏和肌肉中表达。原位杂交实 验表明在精原细胞和精母细胞中，myosin VamRNA在细胞核中大量表达；在早 期精细胞，myosin Va mRNA分布在细胞核和细胞质中；在中期和后期精细胞中， mRNA集中于前顶体囊；成熟精子中，少量mRNA分布在顶体管里。定量PCR 表明myosin Va在有丝分裂期和减数分裂期的表达量较精子形成期的表达量高。 Western blot表明myosinVa在精巢中表达，免疫荧光和免疫电镜发现，myosinVa 分布于精母细胞的细胞质中；在精子形成早期，myosinVa与内质网小泡和前项 体颗粒相结合；在精子形成中期，myosinVa定位于原顶体囊和膜复合体；进入 晚期后，myosinVa与形变的细胞核和线粒体相联系，成熟精子中myosinVa分 布在顶体管和细胞核中。 研究表明，myosinVa可能在中华绒螯蟹的精子形成中运输前顶体颗粒和内 质网小泡，并促使它们融合形成前项体囊，之后在细胞核内凹过程中可能把前 顶体囊锚定在细胞核上。此外，我们发现了中华绒螯蟹精子形成过程中顶体管 的形成机制。本研究首次揭示了myosinVa在甲壳动物精子发生中的作用。 关键词：精子发生，myosinVa，中华绒螯蟹，项体发生，细胞核形变 Ⅱ 浙江人学硕士学位论文 浙江人学硕士学位论文 Abstract Abstract Spermatogenesis is a highly organized process which diploid spermatogonium develops into haploid mature spermatozoon．It can be divided into three phases：the mitotic phase，meiotic phase，and spermiogenesis phase．The Chinese miaen crab Eriocheir sinensis belongs to the Class Crustacea,Decapoda,Brachyura．The spermatozoon of this species is of aflagellated type，it has a spherical acrosome surrounded by the cup-shaped nucleus，which is unique to the brachyuran．Myosin V a, a member of Class V myosin，has been implicated in acrosome biogenesis and vesicle transport during spermatogenesis in mammals．Given the disparity of spermatozoon， we determine to study the role ofmyosin Va during E