植物组织培养的基本技术.pptxVIP

第1章;第一节 实验室的设计; ;实验室设计; ;。;准备室;主要工作：完成完成各种器具的洗涤、干燥、各种药品 贮备、称量、溶解、配制、培养基分装、培养基的灭菌等。 主要设备：水池、工作台、高压灭菌锅、烘箱、药品柜、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器. ;缓冲室;具体要求和工作：面积5m2为宜。进入无菌操作室前在此更衣换鞋，以减少进出时带入杂菌。缓冲间最好也安一盏紫外线灭菌灯，以照射灭菌。;无菌室 ;主要工作：用于植物材料的消毒、接种、培 养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。 主要设备：紫外光源、超净工作台、显微镜、解剖镜、酒精灯、接种器械（接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针）等。; 具体要求： 接种室宜小不宜大，一般7～8平方米，要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配置拉动门，以减少开关门时的空气扰动。 接种室要求干爽安静，清洁明亮。在适当位置吊装1～2盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。最好安装一小型空调，使室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界空气对流。 ;培养室;主要工作：将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。;具体要求：周围墙壁要求有绝热防火的性能。培养室温度一般保持在20—27℃左右，安装空调机。由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度，最好不同种类有不同的培养室。 室内湿度也要求恒定，相对湿度以保持在70%～80%为好，可安装加湿器。控制光照时间可安装定时开关钟，一般需要每天光照10-16h。 ; 主要设备：培养架、空调机、除湿机、摇床、培养箱、紫外光源等。 ;二、设备、仪器 (一)大型设备和仪器; 用于植物材料的培养，其内有温度感受器，控制箱内温度到所调指标。生化培养箱还配有光照装置。; ; ; ;种类较多，用于分离微茎尖可采用双筒实体解剖镜。解剖镜上带有照相装置，根据需要随时对所需材料进???摄影记录。 ;作用：用于称取大量元素、微量元素、维生素、激素等药品精确度0．0001g。;作用：测定培养基及酶制剂的ｐＨ值;作用：低温保存材料，存放药品、培养基母液、激素、酶制剂。;空 调 机;(二）小型用品 1．镊子类(forceps) 常应用医疗上的镊子。 根据操作需要有各种类型 2．剪刀类(scissors) 可采用医疗五官科用的中型剪刀。主要用于切断茎段、叶片等。也可以用弯形剪刀，由于其头部弯曲，可以深入到瓶口中进行剪切。 ; 3. 解剖刀: 切割较小材料和分离茎尖分生组织时，可用解剖刀。刀片要经常调换，使之保持锋利状态，否则切割时会造成挤压，引起周围细胞组织大量死亡，影响培养效果。 4. 解剖针: 解剖针可深入到培养瓶中，转移细胞或愈伤组织。也可用于分离微茎尖的幼叶，可以自制。 5. 接种盘: ; 组培瓶（玻璃）---要求透光度好，能耐高压高温, 以试管、三角瓶、培 养皿等使用较多。 三角锥瓶--- 适用于各种培养（如固体培养、液体培养、大规模培养或一般培养）。 培养皿--- 适于作单细胞的固体平板培养、胚和花药培养和无菌发芽。 试管--- 适合于用少量培养基及试验各种不同配方时选用。 ; 在组织培养中配制培养基，贮藏母液，材料的消毒等需要各种化学实验用的玻璃器。 包括各种型号的烧杯、量筒、移液管、试剂瓶、容量瓶、试管以及移液管架、玻璃棒、滴瓶等。 吸耳球、刷子、记号笔、定时钟、手套、封口膜、脱脂棉、拖鞋、口罩、白大褂、滤纸。 ; 湿度的影响包括培养容器内湿度的保持和环境的湿度条件。 ;第二节 器具洗涤;二、各种器具的洗涤 新器皿；新购置的玻璃器皿一般都有游离的碱性物质，使用前要在1%的盐酸溶液中浸泡24h再清洗，再用自来水冲洗，最后用蒸馏水洗2～3次彻底清洁后，烘干备用。 用过器皿；用过后玻璃器皿如烧杯、试管和培养瓶等要先除去其残渣，清水冲洗后将器皿放入洗衣粉溶液中浸泡一段时间，然后涮去器皿内污物，如洗涤效果不好，可增加洗衣粉水浓度或适当加热，器皿内外都要刷到，再用水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗一遍，干燥后备用。;第三节 培养基及其配制; 在建立培养系统时，首先找到一合适的培养基。在植物组织培养历史进程中，事实上也紧密地伴随着培养基的研制史。 对植物的营养要求的不断认识，对已有培养基的改进，或者将新发现的植物激素、新的有益成分应用于培养基之中，都