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中草药对弧菌的抑制作用研究论文 摘 要：目的 阐明现常用抑菌中草药在水产养殖业的用药疗效，为水产养殖细菌性疾病的防治提供用药参考。方法 采用微量肉汤稀释法测定了12种水产养殖常用的抗菌中药产品对5株常见海洋致病菌的最低抑菌浓度MIC。结果 NZ方与市售“虾倍健”抑菌效果最佳，对副溶血弧菌、嗜水气单胞菌、创伤弧菌、哈维弧菌、溶藻弧菌的最低抑菌浓度在0.313～1.250 g/L，而其他市售抗菌中草药大黄末、六味黄龙散、三黄散、根莲解毒散、七味板蓝根散、大蒜素、病毒速灭亡、穿梅三黄散、白头翁口服液、健肝宝和地锦草末对5种海洋致病菌抑制浓度均大于40.000 g/L。 结论 给水产养殖细菌性疾病的防治提供了用药建议及使用参考。 关键词：NZ方; 弧菌; 中草药 近年来，随着对虾疾病的爆发越来越频繁，我国对虾养殖业特别是华南地区的对虾养殖受病害肆虐情况严重，部分地区对虾幼体患病死亡率达100%，给殖业造成了严重的经济损失，如何有效防治对虾病害侵袭也倍受水产业界人士关注和重视[1-2]。虾的红体、偷死、肌肉白浊、烂眼烂鳃、荧光、黑斑等症状多由弧菌及嗜水气单胞菌引起，而根据上述病症，农业部“用药指导”也给出相关的用药建议。其中，大黄末、地锦草等被广泛推荐应用。根据现行国家标准，抗菌类中药制剂有38种，笔者选取其中最为常用的12种中药制剂与NZ方对5株常见的海洋致病菌进行体外抑菌作用的比较，为水产养殖细菌性疾病的防治提供用药参考。 1 材料与方法 1.1 菌株 标准菌株：副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticuss，V.p;溶藻弧菌Vibrio alginolyticus，V.a;哈维氏弧菌Vibro harveyi，V.h;创伤弧菌Vibrio vulnificus，V.v;嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila，A.h由中国南海研究所提供。 1.2 培养基 2216E 液体培养基青岛高科园海博生物技术有限公司。2216E琼脂培养基青岛高科园海博生物技术有限公司。 1.3 药物及其制备 NZ方檵木叶、半边莲花、地胆草等8味：由中药开发研究所研制。大黄末：每1 kg饲料用本品5.0 g;六味黄龙散：每1 kg饲料用本品4.0 g。三黄散：每1 kg饲料用本品5.0 g;根莲解毒散：每1 kg饲料加本品10.0 g。七味板蓝根散;每1 kg饲料用本品2.5 g;大蒜素：每1 kg饲料用本品0.6 g。虾倍健：每1 kg饲料用本品4.0 g;病毒速灭亡：每1 kg饲料，用本品20 mL。穿梅三黄散：每1 kg饲料用本品4.0 g;白头翁口服液：每1 kg饲料用本品3 mL。健肝宝：每1 kg饲料用本品2.0 g;地锦草末：每1 kg饲料用本品10.0 g。分别取上述药物16.0 g制备成100 mL药液。 1.4 仪器 仪器：分析天平BT211B，德国Sartorius公司;手提式压力蒸汽灭菌锅OIJ2021-04，上海东亚压力容器制造有限公司;双人单面净化工作台SW-CJ-2FD，苏州净化设备有限公司;恒温培养箱上海一恒科学仪器有限公司。 1.5 药物配制 将受试药物用适宜溶剂配制成0.8 g/ mL的药液，高压灭菌后，按二倍递减浓度稀释，共配制成11个梯度浓度的药物稀释液。 1.6 菌种复苏与培养 将冷藏保存的`菌种在琼脂板上划线培养复苏24 h，再挑取生长良好的单菌落接种到装有2216E肉汤培养基的摇菌管中，置恒温培养箱中37 ℃培养至对数期。 1.7 测量 以2216E肉汤作为空白对照液调零，在波长600 nm处测定菌悬液OD值，计算含菌数，并稀释成1×106 CFU/ mL的菌悬液。 1.8 加样孵育 按无菌操作吸取药液和菌悬液各100 μl于96孔板第1-11孔中，第12孔加入配制溶剂和菌悬液各100 μl作阴性对照，置恒温培养箱中37 ℃培养20 h。 1.9 结果判读 肉眼观察，药物最低浓度孔无细菌生长者，即为该试菌MIC值。难判断者，可将该孔中培养液于无菌琼脂板上划线，37 ℃培养20 h后读取结果。 2 结果与分析 NZ方与12种市售抑菌中药品对5种危害较大的海洋致病菌的最低抑菌浓度的测定结果可知，虾倍健抑菌浓度最低，抑菌效果最佳，对副溶血弧菌、嗜水气单胞菌、创伤弧菌的最低抑菌浓度为0.313 g/L;对哈维弧菌、溶藻弧菌的最低抑菌浓度为1.250 g/L;穿梅三黄散次之，在5.000～40.000 g/L;而大蒜素、病毒速灭亡、根莲解毒散的抑菌效果最差，均在40.000